| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 第一章 盐藻NAD-3-磷酸甘油脱氢酶同工酶基因功能域的克隆 | 第16-26页 |
| 1 材料和方法 | 第16-20页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·藻种 | 第16页 |
| ·菌种 | 第16页 |
| ·酶制剂和试剂盒 | 第16-17页 |
| ·盐生杜氏藻培养基 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·引物合成及测序 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-20页 |
| ·盐藻的培养 | 第17页 |
| ·盐藻总RNA的提取 | 第17页 |
| ·总RNA质量的检测 | 第17-18页 |
| ·引物的设计 | 第18页 |
| ·GPD1.8和GPD1.1功能域基因片段的克隆 | 第18-19页 |
| ·TA克隆和测序 | 第19页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-25页 |
| ·盐藻总RNA提取 | 第20页 |
| ·GPD1.8和GPD1.1功能域基因片段的克隆 | 第20-21页 |
| ·GPD1.8和GPD1.1功能域基因片段TA克隆的质粒PCR和双酶切验证 | 第21页 |
| ·序列相似性搜索及蛋白质序列的多重序列比对 | 第21-23页 |
| ·功能域的预测 | 第23-24页 |
| ·GPD1不同功能域蛋白质的基本性质预测 | 第24-25页 |
| ·辅基和底物结合位点识别 | 第25页 |
| 3 讨论 | 第25-26页 |
| 第二章 盐藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶基因的功能域在大肠杆菌中的表达及酶活测定 | 第26-41页 |
| 1 材料和方法 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第26-27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-32页 |
| ·盐生杜氏藻GPD1基因GPD1.8和GPD1.1功能域扩增引物的设计 | 第27页 |
| ·功能域序列的扩增 | 第27-28页 |
| ·TA克隆和测序 | 第28页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第29页 |
| ·样品的制备和蛋白质电泳 | 第29-30页 |
| ·酶的活性测定 | 第30-32页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-38页 |
| ·TA克隆和测序 | 第32-33页 |
| ·构建重组表达载体 | 第33页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第33页 |
| ·重组蛋白的酶活测定 | 第33-38页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第33-35页 |
| ·BSA标准曲线的建立 | 第33页 |
| ·重组蛋白含量的测定 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白的GPD酶活性测定 | 第35-37页 |
| ·NADH浓度标准曲线 | 第35页 |
| ·GPD1.8重组蛋白的GPD酶活测定 | 第35-36页 |
| ·不同NaCl浓度下GPD酶活变化 | 第36页 |
| ·不同DTT浓度下GPD酶活变化 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的GPP酶活性测定 | 第37-38页 |
| ·无机磷浓度标准曲线 | 第37页 |
| ·GPD1.8重组蛋白的GPP酶活测定 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-41页 |
| ·表达载体和酶切位点的选择 | 第38-39页 |
| ·盐藻GPD1.1和GPD1.8蛋白可溶性表达的优化 | 第39-41页 |
| 第三章 盐藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶基因的功能域在酿酒酵母中的功能鉴定 | 第41-55页 |
| 1 材料与方法 | 第41-47页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌种 | 第41页 |
| ·载体 | 第41页 |
| ·酶制剂 | 第41页 |
| ·试剂盒 | 第41页 |
| ·抗生素 | 第41-42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-47页 |
| ·盐藻GPD1基因GPD1.8、GPD1.1功能域扩增引物的设计 | 第42-43页 |
| ·功能域序列的扩增 | 第43-44页 |
| ·TA克隆和测序 | 第44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·酿酒酵母缺陷株感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·电转化酿酒酵母缺陷株细胞 | 第45-46页 |
| ·PCR法验证重组子 | 第46页 |
| ·缺陷型和野生型酿酒酵母耐盐本底检测 | 第46页 |
| ·重组子耐盐能力检测 | 第46页 |
| ·野生型、缺陷型、重组子的生长能力的比较 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-52页 |
| ·TA克隆和测序 | 第47-48页 |
| ·构建重组表达载体 | 第48-49页 |
| ·菌液PCR检测重组子 | 第49页 |
| ·GPD1△和野生型酿酒酵母耐盐本底检测 | 第49-50页 |
| ·重组菌株的耐盐生长能力比较 | 第50-51页 |
| ·野生型、GPD1△、重组型酿酒酵母在高盐胁迫下生长能力的比较 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·酿酒酵母表达载体的选择 | 第52-53页 |
| ·DsGPD1.8和DsGPD1.1在耐盐方面的互补作用 | 第53-55页 |
| 第四章 盐藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶基因在胁迫条件下的表达变化 | 第55-65页 |
| 1 材料和方法 | 第55-58页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·藻种 | 第55页 |
| ·菌种 | 第55页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第55页 |
| ·盐生杜氏藻培养基 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·盐生杜氏藻的各种胁迫处理 | 第56页 |
| ·盐生杜氏藻总RNA的提取及质量的检测 | 第56页 |
| ·反转录反应 | 第56-57页 |
| ·内参基因的选择 | 第57页 |
| ·特异引物和内参引物的设计 | 第57页 |
| ·引物的验证 | 第57页 |
| ·标准曲线制作及样品的realtime PCR反应 | 第57-58页 |
| ·相对定量的计算 | 第58页 |
| ·盐藻细胞甘油含量的测定 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-63页 |
| ·荧光定量PCR的结果 | 第58-63页 |
| ·标准曲线 | 第59页 |
| ·融解曲线 | 第59-60页 |
| ·盐藻细胞在高盐胁迫下GPD1基因表达及胞内甘油合成的变化 | 第60-61页 |
| ·盐藻细胞在其它胁迫下GPD1基因的表达变化 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| ·荧光定量PCR胁迫条件的选择 | 第63页 |
| ·荧光定量PCR | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 综述 | 第72-92页 |
