| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-33页 |
| Ⅰ 嗜麦芽寡养单胞菌研究进展 | 第15-23页 |
| Ⅱ 原位PCR技术及其应用 | 第23-31页 |
| 研究目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二章 斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶产酶条件优化 | 第33-40页 |
| 1 材料与方法 | 第34-35页 |
| ·试验菌种 | 第34页 |
| ·ECPase活性的测定 | 第34页 |
| ·培养基优化 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| ·不同碳源对产酶的影响 | 第35-36页 |
| ·不同氮源对产酶的影响 | 第36页 |
| ·培养时间对产酶的影响 | 第36-37页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第37-38页 |
| ·培养基初始pH值对产酶的影响 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的纯化及性质研究 | 第40-51页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·试验菌株 | 第41页 |
| ·实验动物及主要试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·细菌胞外产物提取 | 第41-42页 |
| ·胞外蛋白酶的分离纯化 | 第42页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第42页 |
| ·DEAE Sephadex A-50层析 | 第42页 |
| ·蛋白酶活力测定 | 第42-43页 |
| ·蛋白酶性质研究 | 第43-44页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第43页 |
| ·外界条件及抑制剂对酶的影响 | 第43页 |
| ·提纯蛋白酶的致病性研究 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-49页 |
| ·蛋白浓度测定标准曲线 | 第44页 |
| ·嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE测定胞外蛋白酶分子量 | 第45-46页 |
| ·嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的性质 | 第46-49页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第46-47页 |
| ·pH对酶活的影响 | 第47页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第47-48页 |
| ·EDTA对酶活的影响 | 第48页 |
| ·PMSF对酶活的影响 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 鱼源嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的致病性研究 | 第51-75页 |
| 1 材料与方法 | 第52-55页 |
| ·试验菌株及试验动物 | 第52页 |
| ·试剂及仪器 | 第52-53页 |
| ·试验方法 | 第53-55页 |
| ·胞外蛋白酶的提纯 | 第53页 |
| ·蛋白酶活力测定 | 第53页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第53页 |
| ·蛋白酶对小鼠致病性研究 | 第53-54页 |
| ·蛋白酶对斑点叉尾鮰的致病性 | 第54页 |
| ·蛋白酶对Vero细胞毒性研究 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-59页 |
| ·提纯的胞外蛋白酶对小鼠的致病性研究 | 第55-57页 |
| ·小鼠临诊症状与病理解剖 | 第55-56页 |
| ·小鼠各器官显微组织病理学变化 | 第56-57页 |
| ·蛋白酶对斑点叉尾鮰的致病性 | 第57-59页 |
| ·临诊症状与病理解剖 | 第57页 |
| ·组织病理变化 | 第57-58页 |
| ·细胞病理学变化 | 第58-59页 |
| ·蛋白酶对Vero细胞毒性 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| 图版ⅠECPase45对小鼠的致病性 | 第62-66页 |
| 图版ⅡECPase45对Vero细胞毒性 | 第66-68页 |
| 图版Ⅲ ECPase45对斑点叉尾(?)的致病性 | 第68-75页 |
| 第五章 嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的化学修饰 | 第75-81页 |
| 1 材料与方法 | 第76-77页 |
| ·试验材料 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-77页 |
| ·酶的提取 | 第76页 |
| ·酶活的测定 | 第76页 |
| ·酶的修饰 | 第76-77页 |
| 2 结果与讨论 | 第77-78页 |
| ·氨基酸残基的化学修饰 | 第77页 |
| ·二硫键和巯基的化学修饰 | 第77-78页 |
| ·EDTA对酶活的影响 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-81页 |
| 第六章 嗜麦芽寡养单胞菌的PCR诊断方法的建立 | 第81-92页 |
| 1 材料与方法 | 第82-85页 |
| ·材料 | 第82页 |
| ·菌株、载体、仪器 | 第82页 |
| ·试剂 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-85页 |
| ·嗜麦芽寡养单胞菌菌种的复活 | 第82页 |
| ·PCR模板的制备 | 第82-83页 |
| ·引物设计 | 第83页 |
| ·PCR基础反应体系 | 第83页 |
| ·PCR基础反应程序 | 第83-84页 |
| ·PCR产物检测 | 第84页 |
| ·PCR方法鉴定 | 第84-85页 |
| 2 结果 | 第85-90页 |
| ·PCR扩增结果 | 第85页 |
| ·PCR方法鉴定 | 第85-90页 |
| ·PCR反应条件优化结果 | 第85-86页 |
| ·PCR反应系统组成优化结果 | 第86-89页 |
| ·PCR敏感性测定结果 | 第89页 |
| ·PCR特异性测定结果 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 第七章 嗜麦芽寡养单胞菌原位杂交及原位PCR检测 | 第92-102页 |
| 1.材料和方法 | 第93-96页 |
| ·试验材料 | 第93-94页 |
| ·试验用菌株 | 第93页 |
| ·试验动物 | 第93页 |
| ·试验试剂 | 第93页 |
| ·主要试验仪器 | 第93-94页 |
| ·原位PCR引物及特异性探针 | 第94页 |
| ·试验方法 | 第94-96页 |
| ·动物试验及材料的固定 | 第94页 |
| ·玻片及盖玻片的制备 | 第94页 |
| ·切片的准备 | 第94页 |
| ·原位PCR扩增 | 第94-95页 |
| ·原位杂交 | 第95-96页 |
| ·结果判断 | 第96页 |
| 2 结果 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| 图版Ⅳ | 第98-102页 |
| 第八章 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
