| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| ·真菌中的β-1,3-葡聚糖合酶基因 | 第10-14页 |
| ·酿酒酵母中的β-1,3-葡聚糖合酶基因 | 第11-12页 |
| ·其他真菌中的β-1,3-葡聚糖合酶基因 | 第12-14页 |
| ·β-1,3-葡聚糖合酶的结构 | 第14-15页 |
| ·β-1,3-葡聚糖合酶在细胞中的定位 | 第15-16页 |
| ·β-1,3-葡聚糖合酶的调控机理 | 第16-17页 |
| ·β-1,3-葡聚糖合酶抑制剂研究的发展前景 | 第17页 |
| ·本课题的研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 Δfks1酵母菌株作为葡聚糖合酶抑制剂筛选模型的研究 | 第18-28页 |
| ·材料与方法 | 第19-22页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌种 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·质粒和引物 | 第19-20页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-22页 |
| ·PCR合成FKS1基因敲除片段 | 第20页 |
| ·PCR产物纯化 | 第20页 |
| ·酵母高效转化 | 第20-21页 |
| ·转化子鉴定 | 第21页 |
| ·酵母对药物的敏感性测试 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-26页 |
| ·酵母FKS1基因的敲除 | 第22页 |
| ·Δfks1菌株的验证 | 第22-24页 |
| ·Δfks1菌株对不同靶标抗真菌药物的敏感性 | 第24-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 筛选土壤中葡聚糖合酶抑制剂产生菌的研究 | 第28-44页 |
| ·材料与方法 | 第28-32页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·土样 | 第28-29页 |
| ·菌种 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·酵母活化和菌量测定 | 第30页 |
| ·植物病原真菌的培养 | 第30页 |
| ·土壤菌量测定 | 第30-31页 |
| ·双层平板混合筛选法 | 第31页 |
| ·影印平板筛选法 | 第31页 |
| ·分组发酵筛选法 | 第31页 |
| ·菌株对酵母的抗性检测 | 第31-32页 |
| ·菌株对植物病原真菌的抗性检测 | 第32页 |
| ·拮抗菌株的个体形态观察 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-42页 |
| ·双层平板混合筛选法 | 第32-37页 |
| ·培养基成分的选择 | 第32-33页 |
| ·双层平板混合法筛选土壤微生物 | 第33-37页 |
| ·影印平板法 | 第37页 |
| ·分组发酵法 | 第37-39页 |
| ·筛选抑菌微生物组 | 第37-38页 |
| ·抑菌微生物的分离纯化 | 第38-39页 |
| ·抑菌微生物抗菌谱分析 | 第39-41页 |
| ·菌体形态 | 第41页 |
| ·发酵时间对抗真菌活性的影响 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 灰霉葡聚糖合酶基因的研究 | 第44-59页 |
| ·材料与方法 | 第44-50页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·菌种 | 第44-45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·质粒和引物 | 第45-46页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-50页 |
| ·酵母高效质粒转化及转化子鉴定 | 第46-47页 |
| ·PCR合成FKS2基因敲除片段 | 第47-48页 |
| ·PCR产物纯化 | 第48页 |
| ·DNA片段转化酵母细胞及转化子鉴定 | 第48页 |
| ·提取灰霉RNA | 第48-49页 |
| ·RT-PCR合成灰霉FKS基因cDNA | 第49页 |
| ·构建FKS基因cDNA载体 | 第49-50页 |
| ·序列测定及分析 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-57页 |
| ·用YcpT-FKS1质粒转化Δfks1酵母菌株 | 第50-51页 |
| ·酵母FKS1基因的敲除 | 第51页 |
| ·Δfks2菌株的验证 | 第51-53页 |
| ·灰霉推定FKS基因的序列分析 | 第53-54页 |
| ·灰霉RNA的提取和RT-PCR扩增 | 第54页 |
| ·灰霉中推定的FKS基因的克隆 | 第54-56页 |
| ·FKS基因cDNA的测序 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67页 |