快速型重组人胰岛素及C肽的研究
| 第一章 文献综述 | 第1-32页 |
| ·糖尿病及其治疗 | 第15页 |
| ·胰岛素 | 第15-21页 |
| ·什么是胰岛素 | 第15-17页 |
| ·胰岛素的分类 | 第17页 |
| ·胰岛素类似物的研究 | 第17-21页 |
| ·C肽 | 第21-23页 |
| ·什么是C肽 | 第21页 |
| ·C肽的功能 | 第21-23页 |
| ·重组人胰岛素及C肽的研究进展 | 第23-28页 |
| ·胰岛素的研究历史 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第24-27页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第27-28页 |
| ·外源基因表达产物的分离纯化 | 第28-30页 |
| ·重组蛋白分离纯化方法选择的基础原则 | 第28-29页 |
| ·离子交换层析 | 第29-30页 |
| ·凝胶层析 | 第30页 |
| ·亲和层析 | 第30页 |
| ·膜分离 | 第30页 |
| ·本课题的研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 菌种筛选与培养 | 第32-38页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌种 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·细胞光密度测定 | 第33页 |
| ·pH值的测定 | 第33页 |
| ·蛋白含量测定方法(考马斯亮蓝G-250法) | 第33-34页 |
| ·发酵液中残余甘油的测定 | 第34-35页 |
| ·甲醇利用表型确定 | 第35页 |
| ·对高产菌株的初筛和复筛 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-37页 |
| ·毕赤酵母生长曲线 | 第35-37页 |
| ·MM、MD平板筛选结果 | 第37页 |
| ·高产菌株筛选结果 | 第37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 发酵工艺确定 | 第38-50页 |
| ·前言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·菌种 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·摇瓶培养方法 | 第39-40页 |
| ·10L发酵罐培养 | 第40页 |
| ·蛋白质的凝胶电泳 | 第40-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-48页 |
| ·基础培养基配方的确定 | 第43页 |
| ·毕赤酵母发酵罐培养生长曲线 | 第43-44页 |
| ·对发酵影响较大的因素筛选 | 第44-47页 |
| ·甘油加量的比较 | 第47-48页 |
| ·甲醇加量的比较 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 第四章 分离纯化工艺的研究 | 第50-66页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·实验材料和方法 | 第50-52页 |
| ·实验试剂 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50-51页 |
| ·分析方法 | 第51-52页 |
| ·实验过程与结果 | 第52-63页 |
| ·中空纤维超滤膜分离 | 第52-54页 |
| ·沉淀蛋白 | 第54-56页 |
| ·离子交换层析 | 第56-60页 |
| ·固定化金属离子亲和层析 | 第60-62页 |
| ·糖基化分析结果 | 第62-63页 |
| ·分离工艺的确定 | 第63-66页 |
| 第五章 酶切及产物后分离 | 第66-71页 |
| ·前言 | 第66页 |
| ·实验材料和方法 | 第66-68页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| ·结果 | 第68-70页 |
| ·Western blot印迹分析 | 第68-69页 |
| ·酶切反应及重组人胰岛素和C肽的纯化 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第六章 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第82页 |
