| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| ·胸腺五肽介绍 | 第11-13页 |
| ·胸腺五肽的发现 | 第11页 |
| ·胸腺五肽的治疗学基础 | 第11-12页 |
| ·胸腺五肽的的治疗作用、保健作用及临床应用 | 第12-13页 |
| ·cTP环肽的优势 | 第13-14页 |
| ·蛋白内含肽介导的蛋白纯化与环化策略 | 第14-19页 |
| ·蛋白内含肽简介 | 第14-17页 |
| ·蛋白内含肽介导蛋白纯化 | 第17-18页 |
| ·蛋白内含肽介导蛋白环化 | 第18-19页 |
| ·本研究中环肽制备工艺策略 | 第19-23页 |
| ·研究目的、研究意义及研究内容 | 第23-25页 |
| ·研究目的 | 第23页 |
| ·研究意义与内容 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 实验材料与基本技术操作 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验菌株、质粒与工具酶 | 第26页 |
| ·主要化学试剂与材料 | 第26-27页 |
| ·实验主要试剂配方 | 第27-31页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·碱裂解法小提质粒试剂 | 第27-28页 |
| ·IPTG贮存液 | 第28页 |
| ·纯化系统专用缓冲液(buffer)配方 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE电泳试剂和凝胶配方(普通胶) | 第28-29页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE电泳试剂和凝胶配方(小分子胶) | 第29-30页 |
| ·蛋白电泳凝胶染色液、脱色液配方(考染法) | 第30页 |
| ·BSS溶液配方 | 第30-31页 |
| ·HanK’s液配方(10×): | 第31页 |
| ·基本技术操作 | 第31-35页 |
| ·碱裂解法小提质粒 | 第31-32页 |
| ·QIAGEN质粒抽提试剂盒操作过程 | 第32页 |
| ·DNA的酶切 | 第32页 |
| ·DNA的体外连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·质粒转化操作 | 第32-33页 |
| ·(Tricine-)SDS-PAGE电泳操作 | 第33页 |
| ·蛋白纯化操作 | 第33-35页 |
| 第三章 高效表达菌株的构建 | 第35-41页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·cTP线性前体(linear cTP)的基因设计 | 第35页 |
| ·cTP线性前体基因合成与重组表达载体pTW-cTP的构建 | 第35-36页 |
| ·工程菌cTP-ER2566的构建 | 第36页 |
| ·目的融合蛋白(CBD-Inteinl-cTP-Intein2-CBD)的表达 | 第36页 |
| ·蛋白电泳条件 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-38页 |
| ·表达载体pTW-cTP的测序鉴定 | 第37页 |
| ·工程菌cTP-ER2566构建 | 第37-38页 |
| ·试验讨论 | 第38-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 工程菌cTP-ER2566的发酵工艺优化 | 第41-57页 |
| ·试验方法 | 第41-42页 |
| ·上罐前参数探索条件 | 第41页 |
| ·蛋白电泳条件 | 第41页 |
| ·生长曲线绘制方法 | 第41页 |
| ·上罐发酵条件 | 第41页 |
| ·菌体收集与破碎 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-54页 |
| ·工程菌cTP-ER2566的生长曲线 | 第42页 |
| ·诱导剂IPTG加入时间的优化 | 第42-44页 |
| ·诱导剂IPTG用量的优化 | 第44-45页 |
| ·培养基装量的影响 | 第45-47页 |
| ·菌体接种量的优化 | 第47-48页 |
| ·碳源的筛选 | 第48-50页 |
| ·甘油浓度的优化 | 第50-51页 |
| ·IPTG诱导温度及诱导时间的筛选 | 第51-53页 |
| ·发酵罐(5L)发酵初探 | 第53-54页 |
| ·试验讨论 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 第五章 Intein介导的cTP环肽制备与活性检测 | 第57-70页 |
| ·试验方法 | 第57-61页 |
| ·亲合层析、在柱切割与环化 | 第57-58页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE鉴定 | 第58页 |
| ·飞行质谱鉴定产物 | 第58页 |
| ·蛋白测定与效率分析 | 第58-59页 |
| ·碳粒廓清实验检测cTP促巨噬细胞吞噬功能的活性 | 第59页 |
| ·溶血空斑实验检测cTP促B细胞功能的活性 | 第59-61页 |
| ·试验结果 | 第61-66页 |
| ·Intein的可诱导切割及cTP环肽的制备 | 第61-62页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·激光飞行质谱鉴定结果 | 第63-65页 |
| ·cTP促巨噬细胞吞噬功能的活性检测 | 第65页 |
| ·cTP促B细胞功能的活性检测 | 第65-66页 |
| ·试验讨论 | 第66-69页 |
| ·制备效率 | 第66-68页 |
| ·环肽活性 | 第68-69页 |
| ·制备工艺特点 | 第69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第六章 研究结论、创新与展望 | 第70-71页 |
| ·研究结论 | 第70页 |
| ·研究创新之处 | 第70页 |
| ·研究展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
| 1 重组表达载体pTW-cTP的测序图 | 第75-76页 |
| 2 未透析cTP环肽制备样品的飞行质谱 | 第76-77页 |
| 3 透析后cTP环肽制备样品的飞行质谱 | 第77-78页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
