| 目录 | 第1-6页 |
| 缩写 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言与综述 | 第10-15页 |
| 一 细胞对钙的依赖性 | 第10页 |
| 二 细胞钙的作用和功能及其与酵母细胞增殖之间的关系 | 第10-12页 |
| 三 细胞内钙离子分布研究的重要性 | 第12页 |
| 四 研究钙分布的手段,及其改进的沿革和新一代YC2.1的发展 | 第12-15页 |
| 第一节：YC2.1基因重组质粒的构建、转化和诱导表达 | 第15-30页 |
| 1.引言 | 第15页 |
| 2.材料与方法 | 第15-24页 |
| ·仪器与试剂 | 第15-16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·质粒和菌株 | 第16-17页 |
| ·细胞培养 | 第17页 |
| ·pESP-YC2.1质粒的构建 | 第17-23页 |
| ·所用引物和构建流程 | 第17页 |
| ·pESP-YC2.1~-质粒的构建 | 第17-21页 |
| ·pESP-3载体的处理 | 第18页 |
| ·YC2.1基因的获得 | 第18-19页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第19-20页 |
| ·连接反应 | 第20页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第20页 |
| ·克隆的鉴定：菌落PCR法 | 第20页 |
| ·pESP-YC2.1~-质粒的测序 | 第20-21页 |
| ·pESP-YC2.1质粒的构建 | 第21-22页 |
| ·pESP-YC2.1~-质粒的处理 | 第21页 |
| ·Linker的处理 | 第21页 |
| ·连接反应 | 第21页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第21-22页 |
| ·克隆的鉴定：菌落PCR法 | 第22页 |
| ·pESP-YC2.1质粒的测序 | 第22页 |
| ·pESP-YC2.1质粒的大量提取 | 第22-23页 |
| ·裂殖酵母菌的转化：LiAc法 | 第23-24页 |
| ·裂殖酵母感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·裂殖酵母菌的转化 | 第24页 |
| ·克隆的鉴定：菌落PCR法 | 第24页 |
| 3.结果与讨论 | 第24-30页 |
| ·pESP-YC2.1~-质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·pESP-YC2.1~-质粒的菌落PCR鉴定结果 | 第25-27页 |
| ·pESP-YC2.1~-质粒的测序结果 | 第27页 |
| ·pESP-YC2.1质粒的构建 | 第27页 |
| ·pESP-YC2.1质粒的菌落PCR鉴定结果 | 第27页 |
| ·pESP-YC2.1质粒的测序结果 | 第27-29页 |
| ·裂殖酵母表达YC2.1基因重组质粒的转化 | 第29页 |
| ·裂殖酵母克隆的菌落PCR鉴定结果 | 第29-30页 |
| 第二节：YC2.1蛋白诱导表达研究 | 第30-34页 |
| 1.引言 | 第30页 |
| 2.材料与方法 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·试剂与仪器 | 第30页 |
| ·凹玻片和盖玻片的准备 | 第30页 |
| ·重组质粒pESP-YC2.1的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·菌株 | 第30-31页 |
| ·实验步骤 | 第31页 |
| ·制片 | 第31页 |
| ·多聚赖氨酸法 | 第31页 |
| ·伴刀豆球蛋白法 | 第31页 |
| ·YC2.1蛋白诱导表达条件的优化 | 第31页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·实验步骤 | 第31页 |
| 3.结果与讨论 | 第31-34页 |
| ·YC2.1蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·制片方法的优化 | 第32-33页 |
| ·YC2.1蛋白诱导表达的最佳条件 | 第33-34页 |
| 第三节：裂殖酵母细胞内钙离子的分布 | 第34-42页 |
| 1.引言 | 第34页 |
| 2.材料与方法 | 第34-37页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·试剂与仪器 | 第34页 |
| ·凹玻片和盖玻片的准备 | 第34页 |
| ·观察YC2.1蛋白指示的裂殖酵母细胞内钙离子浓度的分布 | 第34-35页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·激光共聚焦观察条件 | 第34-35页 |
| ·实验步骤 | 第35页 |
| ·钙离子荧光探针fluo-3指示的裂殖酵母细胞内钙离子浓度的分布 | 第35页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·激光共聚焦观察条件 | 第35页 |
| ·实验步骤 | 第35页 |
| ·DAPI的核染色 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第35-36页 |
| ·激光共聚焦观察条件 | 第36页 |
| ·实验步骤 | 第36页 |
| ·细胞分裂过程中胞内钙离子的分布 | 第36-37页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·激光共聚焦观察条件 | 第36页 |
| ·实验步骤 | 第36-37页 |
| 3.结果 | 第37-40页 |
| ·重组表达YC2.1蛋白指示的裂殖酵母细胞内钙离子浓度分布 | 第37-38页 |
| ·钙离子荧光探针fluo-3指示的裂殖酵母细胞内钙离子浓度分布 | 第38-39页 |
| ·DAPI的核染色观察 | 第39页 |
| ·细胞分裂过程中胞内钙离子的分布 | 第39-40页 |
| 4.讨论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 附录图1 | 第46-47页 |
| 附录图2 | 第47-48页 |
| 作者攻读硕士学位期间发表的论文清单 | 第48页 |
