| 原创性声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-9页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-37页 |
| 一 盐胁迫对植物生长的影响 | 第15-16页 |
| 二 植物适应盐胁迫的机理 | 第16-18页 |
| 三 蛋白激酶在植物抗盐信号传导中的作用 | 第18-35页 |
| 1 蛋白激酶的结构 | 第18-19页 |
| 2 蛋白激酶家族的分类 | 第19-21页 |
| 3 植物中参与抗盐信号途径的蛋白激酶 | 第21-35页 |
| ·钙依赖而钙调素不依赖的蛋白激酶(CDPK) | 第21-23页 |
| ·SNF1-相关蛋白激酶(sucrose non-fermenting-1-related Protein kinase,SnRK) | 第23-29页 |
| ·植物中的SnRK1亚家族 | 第23-24页 |
| ·植物中的SnRK2亚家族 | 第24-27页 |
| ·植物中的SnRK3亚家族 | 第27-29页 |
| ·促分裂原活化蛋白质激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK) | 第29-32页 |
| ·其他类型的蛋白激酶 | 第32-35页 |
| ·植物类糖原合酶激酶(Glycogen synthase kinase 3,GSK-3) | 第32-33页 |
| ·受体蛋白激酶(receptor protein kinase,RPK) | 第33-34页 |
| ·核糖体蛋白激酶(ribosomal-protein kinase) | 第34页 |
| ·转录调控蛋白激酶(transcription-regulation protein kinase) | 第34-35页 |
| 四 本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 第一部分 玉米抗盐胁迫基因ZmPti1的克隆、序列分析及功能验证 | 第37-83页 |
| 第一章 前言 | 第38-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-59页 |
| 1 试验材料和试剂 | 第40页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·菌种与质粒 | 第40页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-59页 |
| ·玉米幼苗的培养及处理 | 第40-41页 |
| ·玉米总RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR扩增玉米ZmPti1基因 | 第42-46页 |
| ·第一链的反转录 | 第42页 |
| ·PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第43页 |
| ·PCR扩增产物与pGEM-T载体的连接 | 第43-44页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态 | 第44页 |
| ·pGEM-T载体连接体系的转化(热击法) | 第44-45页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第45页 |
| ·质粒DNA酶切验证 | 第45页 |
| ·DNA测序 | 第45-46页 |
| ·ZmPti1蛋白的酵母表达及活性检测 | 第46-52页 |
| ·ZmPti1酵母表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·酵母细胞感受态制备及转化 | 第47-48页 |
| ·酵母质粒DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·ZmPti1基因在酵母中的表达 | 第49页 |
| ·ZmPti1的蛋白质免疫印迹分析 | 第49-51页 |
| ·含有His-tag的表达蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·溶液中ZmPti1蛋白的激酶活性检测 | 第51-52页 |
| ·ZmPti1基因的表达分析 | 第52页 |
| ·拟南芥的ZmPti1基因转化及鉴定 | 第52-55页 |
| ·ZmPti1植物表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第53页 |
| ·农杆菌介导的基因转化 | 第53-54页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第54-55页 |
| ·转ZmPti1基因拟南芥的抗病性鉴定 | 第55-56页 |
| ·植物材料的准备 | 第55页 |
| ·病原菌的准备 | 第55-56页 |
| ·接种病原菌 | 第56页 |
| ·转ZmPti1基因拟南芥的抗盐性鉴定 | 第56-59页 |
| ·过量表达ZmPti1基因对盐胁迫下拟南芥生长形态、生物量及产量的影响 | 第56-57页 |
| ·过量表达ZmPti1基因对盐胁迫下拟南芥生理生化指标的影响 | 第57-59页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第59-83页 |
| 1 结果 | 第59-78页 |
| ·ZmPti1基因的克隆与序列分析 | 第59-62页 |
| ·玉米根中总RNA的提取 | 第59页 |
| ·ZmPti1的RT-PCR | 第59-60页 |
| ·PCR产物的pGEM-T载体连接及验证 | 第60-61页 |
| ·ZmPti1蛋白序列的分析 | 第61-62页 |
| ·ZmPti1蛋白序列与相关序列的比对及进化树分析 | 第62页 |
| ·ZmPti1蛋白的酵母表达及激酶活性测定 | 第62-66页 |
| ·ZmPti1蛋白酵母表达载体的构建 | 第62-65页 |
| ·ZmPti1蛋白在酵母中的表达及激酶活性测定 | 第65-66页 |
| ·ZmPti1基因的表达分析 | 第66-68页 |
| ·ZmPti1的转基因植株的获得和性状检测 | 第68-78页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·拟南芥转化植株的筛选 | 第69-70页 |
| ·拟南芥转基因植株的分子检测 | 第70-71页 |
| ·拟南芥转基因植株抗病性鉴定 | 第71-72页 |
| ·转基因拟南芥植株抗盐性鉴定 | 第72-78页 |
| 2 讨论 | 第78-82页 |
| ·ZmPti1编码一个有功能的蛋白激酶 | 第78-79页 |
| ·ZmPti1的表达受不同逆境条件的调控 | 第79-80页 |
| ·ZmPti1提高了转基因植株的抗盐性 | 第80-81页 |
| ·ZmPti1在逆境胁迫信号途径中可能的地位 | 第81-82页 |
| 3 结论 | 第82-83页 |
| 第二部分 玉米盐胁迫诱导基因ZmSPK1的克隆、序列分析及功能验证 | 第83-102页 |
| 第一章 前言 | 第84-85页 |
| 第二章 材料与方法 | 第85-87页 |
| 1 试验材料和试剂 | 第85页 |
| 2 试验方法 | 第85-87页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第87-102页 |
| 1 结果 | 第87-99页 |
| ·ZmSPK1基因的克隆与序列分析 | 第87-92页 |
| ·玉米根中总RNA的提取 | 第87页 |
| ·ZmSPK1的RT-PCR | 第87-88页 |
| ·PCR产物的pGEM-T载体连接及验证 | 第88-89页 |
| ·ZmSPK1蛋白序列的分析 | 第89-90页 |
| ·ZmSPK1蛋白序列与相关序列的比对及进化树分析 | 第90-92页 |
| ·ZmSPK1蛋白的酵母表达及激酶活性测定 | 第92-94页 |
| ·ZmSPK1蛋白酵母表达载体的构建 | 第92-93页 |
| ·ZmSPK1蛋白在酵母中的表达及激酶活性测定 | 第93-94页 |
| ·ZmSPK1基因的表达分析 | 第94-96页 |
| ·ZmSPK1的转基因植株的获得和性状检测 | 第96-99页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第96-97页 |
| ·拟南芥转化植株的筛选 | 第97页 |
| ·拟南芥转基因植株的分子检测 | 第97-99页 |
| 2 讨论 | 第99-101页 |
| 3 结论 | 第101-102页 |
| 第三部分 玉米盐胁迫诱导基因ZmASK1的克隆、序列分析及功能验证 | 第102-121页 |
| 第一章 前言 | 第103-105页 |
| 第二章 材料与方法 | 第105-107页 |
| 1 试验材料和试剂 | 第105页 |
| 2 试验方法 | 第105-107页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第107-121页 |
| 1 结果 | 第107-118页 |
| ·ZmASK1基因的克隆与序列分析 | 第107-114页 |
| ·玉米根中总RNA的提取 | 第107页 |
| ·ZmASK1的RT-PCR | 第107-108页 |
| ·PCR产物的pGEM-T载体连接及验证 | 第108-109页 |
| ·ZmASK1蛋白序列的分析 | 第109-111页 |
| ·ZmASK1蛋白序列与相关序列的比对及进化树分析 | 第111-114页 |
| ·ZmASK1基因的表达分析 | 第114-115页 |
| ·ZmASK1的转基因植株的获得和性状检测 | 第115-118页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第115-116页 |
| ·拟南芥转化植株的筛选 | 第116-117页 |
| ·拟南芥转基因植株的分子检测 | 第117-118页 |
| 2 讨论 | 第118-120页 |
| 3 结论 | 第120-121页 |
| 全文总结以及研究的创新点 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-137页 |
| 附录 | 第137-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第149页 |
