| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-26页 |
| 1. WNT蛋白家族 | 第10-12页 |
| 2. WNT信号通路 | 第12-15页 |
| 3. WNT信号通路与脂肪生成的关系 | 第15-18页 |
| 4. WNT信号通路与疾病 | 第18-20页 |
| 5. RNA 干扰方法的介绍 | 第20-26页 |
| 第二章 WNT5B 和FZD4 基因在脂肪代谢中的作用 | 第26-56页 |
| 1. 实验材料 | 第26页 |
| 2. 实验仪器和试剂 | 第26-32页 |
| 3. 方法步骤 | 第32-45页 |
| ·3T3-L1 脂肪前体细胞诱导分化 | 第32-34页 |
| ·RT-PCR 方法测定基因的表达水平 | 第34-36页 |
| ·pcDNA4-Fzd4 表达载体的构建 | 第36-40页 |
| ·pQsupR/F –siRNA 的构建 | 第40页 |
| ·siRNA 质粒有效靶序列的筛选 | 第40-43页 |
| ·siRNA 阳性质粒的病毒包装 | 第43-44页 |
| ·病毒包装的siRNA 质粒感染3T3-L1 细胞 | 第44-45页 |
| 4. 实验结果 | 第45-56页 |
| ·3T3-L1 细胞分化及油红染色结果 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR 方法测定Fzd4 和Wnt56 的表达水平 | 第46-47页 |
| ·pcDNA4-Fzd4 的构建 | 第47-49页 |
| ·pQsupR/F–siRNA 的构建 | 第49-51页 |
| ·绿色荧光观察 | 第51-52页 |
| ·Western Blotting 检测 | 第52-54页 |
| ·病毒包装的siRNA 质粒对3T3-L1 脂肪分化的影响 | 第54-56页 |
| 第三章 WNT5B 和WNT9A 蛋白的性质研究 | 第56-69页 |
| 1. 实验材料 | 第56页 |
| 2. 实验仪器和试剂 | 第56-58页 |
| 3. 方法步骤 | 第58-62页 |
| ·RT-PCR 调取Wnt9a 基因 | 第58-59页 |
| ·Wnt56 原核表达载体的构建 | 第59页 |
| ·Wnt9a 原核表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第60-61页 |
| ·包涵体蛋白经变性Ni 柱纯化并复性 | 第61-62页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第62页 |
| 4.实验结果 | 第62-69页 |
| ·RT-PCR 调取 Wnt9a 基因 | 第62-63页 |
| ·Wnt5b 蛋白的表达 | 第63-65页 |
| ·Wnt9a 蛋白的表达 | 第65-67页 |
| ·包涵体蛋白经变性 Ni 柱 | 第67-68页 |
| ·获得抗体 | 第68-69页 |
| 第四章 讨论 | 第69-74页 |
| 第五章 小结 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致 谢 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第87页 |
