| 一、摘要 | 第1-10页 |
| 1 中文摘要 | 第6-8页 |
| 2 英文摘要 | 第8-10页 |
| 二、前言 | 第10-12页 |
| 三、材料与方法 | 第12-40页 |
| 1 实验材料 | 第12-13页 |
| ·病毒、细胞、质粒和菌株 | 第12页 |
| ·主要试剂 | 第12-13页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| 2 实验方法 | 第13-40页 |
| ·细胞培养液，维持液和冻存液的配制 | 第13页 |
| ·培养基的配制 | 第13-14页 |
| ·PCR引物合成 | 第14-15页 |
| ·病毒的培养及收获 | 第15-17页 |
| ·细胞总RNA(病毒RNA)的提取 | 第17-18页 |
| ·RT-PCR扩增M1基因 | 第18-19页 |
| ·M1基因克隆到pMD18-T simple载体中 | 第19-24页 |
| ·M1基因毕赤酵母分泌表达载体的构建 | 第24-29页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母菌 | 第29-34页 |
| ·重组菌株目的蛋白的诱导表达(小量培养) | 第34-35页 |
| ·表达产物鉴定 | 第35-40页 |
| 四、结果 | 第40-70页 |
| 1 汉坦病毒培养 | 第40页 |
| 2 汉坦病毒Z10株和L99株M1基因RT-PCR扩增结果 | 第40-41页 |
| 3 M1基因克隆到pMD18-T simple载体中及鉴定 | 第41-53页 |
| ·Z10株M1基因T-A克隆鉴定结果 | 第41页 |
| ·L99株M1基因T-A克隆鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·汉坦病毒M1基因序列分析结果 | 第42-53页 |
| 4 汉坦病毒M1基因毕赤酵母分泌表达载体的构建及鉴定 | 第53-57页 |
| ·Z10株M1基因定向克隆鉴定结果 | 第53-55页 |
| ·L99株M1基因定向克隆鉴定结果 | 第55-57页 |
| ·M1基因定向克隆载体序列测定结果 | 第57页 |
| 5 重组质粒转化毕赤酵母菌 | 第57-62页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第57-58页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第58-62页 |
| 6 表达产物鉴定 | 第62-70页 |
| ·表达产物的浓缩 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE结果 | 第62-66页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第66-68页 |
| ·Dot Blot鉴定 | 第68-70页 |
| 五、讨论 | 第70-81页 |
| 1 HV感染的流行病学 | 第70-72页 |
| 2 HV M基因的结构和功能 | 第72-74页 |
| 3 毕赤酵母表达系统 | 第74-76页 |
| 4 酵母表达载体的构建和毕赤酵母的转化 | 第76-79页 |
| 5 目的蛋白的表达和鉴定 | 第79-81页 |
| 六、结论 | 第81-83页 |
| 七、致谢 | 第83-84页 |
| 八、参考文献 | 第84-86页 |
