| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-36页 |
| 第一节 藻胆蛋白研究进展 | 第10-23页 |
| 1 藻胆蛋白的结构与特性 | 第10-15页 |
| 2 藻胆蛋白分子的起源及进化 | 第15-16页 |
| 3 藻胆蛋白的基因工程 | 第16-18页 |
| 4 藻胆蛋白的功能及应用开发 | 第18-23页 |
| ·藻胆蛋白的生物学功能 | 第18-21页 |
| ·藻胆蛋白的应用 | 第21-23页 |
| 第二节 生物制药研发中的工艺放大 | 第23-29页 |
| 1 发酵工艺放大过程中的影响因素 | 第23-24页 |
| 2 常见的发酵工艺放大方法 | 第24-28页 |
| 3 纯化工艺的放大 | 第28-29页 |
| 第三节 基因工程药物的质量控制 | 第29-34页 |
| 1 基因工程药物的质量要求 | 第29-30页 |
| 2 重组DNA 药物质量控制要点 | 第30-33页 |
| 3 蛋白质性质的鉴定 | 第33-34页 |
| 4 安全性评价 | 第34页 |
| 第四节 本论文工作研究的目标、意义及总体思路 | 第34-36页 |
| 第二章 雷普克生产菌株的改造及遗传稳定性研究 | 第36-57页 |
| 第一节 雷普克生产菌株的抗性基因改造 | 第36-50页 |
| 1 材料和方法 | 第36-44页 |
| 2 结果 | 第44-49页 |
| ·卡那霉素抗性基因序列分析 | 第45页 |
| ·卡那抗性质粒的构建及酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·抗性基因替换前后菌株生长曲线 | 第46-47页 |
| ·抗性基因替换前后质粒稳定性的变化 | 第47-48页 |
| ·抗性基因替换前后雷普克表达量比较 | 第48-49页 |
| ·Westen blot 分析 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 第二节 雷普克生产菌株遗传稳定性的研究 | 第50-57页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 2 结果 | 第52-54页 |
| ·菌落形态与生长 | 第52页 |
| ·质粒稳定性检查 | 第52-53页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第53-54页 |
| ·雷普克的Western blot 鉴定 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 雷普克发酵及纯化工艺的放大 | 第57-68页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 2 结果 | 第59-66页 |
| ·雷普克5L 发酵中,不同的补料方式对发酵过程的影响 | 第59-61页 |
| ·20m L 小柱的纯化工艺 | 第61页 |
| ·雷普克的30L 中试发酵 | 第61-64页 |
| ·雷普克30L 发酵中重组质粒的稳定性 | 第64-65页 |
| ·雷普克纯化工艺的放大 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 雷普克质量检定标准的建立 | 第68-100页 |
| 第一节 种子库的建立、检定、保存 | 第68-73页 |
| 1 种子库的建立与检定 | 第68-69页 |
| 2 生产种子库的检定 | 第69-72页 |
| ·划种LB 琼脂平板 | 第69页 |
| ·涂片革兰氏染色 | 第69-70页 |
| ·对抗生素的抗性 | 第70页 |
| ·电镜检查 | 第70页 |
| ·生化反应 | 第70页 |
| ·雷普克的表达量 | 第70-71页 |
| ·质粒检查 | 第71页 |
| ·表达的雷普克抗原性鉴定 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 第二节 雷普克终产品质量控制体系的建立 | 第73-100页 |
| 1 材料和方法 | 第73-89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-98页 |
| ·活性检测 | 第89页 |
| ·雷普克纯度鉴定 | 第89-92页 |
| ·雷普克的分子量测定 | 第92页 |
| ·雷普克的抗原性鉴定(Western blot) | 第92-93页 |
| ·外源性DNA 残留量的测定 | 第93页 |
| ·宿主菌蛋白残留量的测定 | 第93-94页 |
| ·细菌内毒素检查 | 第94-96页 |
| ·等电点 | 第96-97页 |
| ·紫外光谱扫描 | 第97页 |
| ·肽图分析 | 第97-98页 |
| ·N-末端氨基酸序列测定 | 第98页 |
| 3 讨论 | 第98-99页 |
| 4 本章小结 | 第99-100页 |
| 第五章 雷普克生物活性的进一步研究 | 第100-128页 |
| 第一节 雷普克抗肿瘤机制的探索 | 第100-109页 |
| 1 材料与方法 | 第100-103页 |
| 2 结果与分析 | 第103-109页 |
| ·雷普克的体外抗肿瘤试验 | 第103页 |
| ·雷普克对人肝癌裸小鼠移植瘤SMMC-7721 的实验治疗作用 | 第103-104页 |
| ·雷普克的抗肿瘤机制研究 | 第104-107页 |
| ·雷普克对羟自由基清除能力研究 | 第107-109页 |
| 第二节 雷普克系列组份抗肿瘤活性的筛选 | 第109-128页 |
| 1 材料与方法 | 第109-119页 |
| 2 结果与分析 | 第119-125页 |
| ·雷普克系列组份的表达及纯化 | 第119页 |
| ·APC 的纯化提取 | 第119-123页 |
| ·雷普克系列组分的体内药效学筛选 | 第123页 |
| ·Hβ对小鼠肝癌H22 的实验治疗作用 | 第123-124页 |
| ·Mβ、Hβ对人肝癌SMMC-7721 裸小鼠移植瘤的实验治疗作用 | 第124-125页 |
| 3 讨论 | 第125-127页 |
| 4 本章小结 | 第127-128页 |
| 结论 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-145页 |
| 仪器 | 第145-146页 |
| 发表论文 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147页 |
