| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-32页 |
| ·葡萄白粉病 | 第13-15页 |
| ·葡萄白粉病的起源及分布 | 第13页 |
| ·葡萄属植物对白粉病抗性的遗传研究进展 | 第13页 |
| ·葡萄属植物对白粉病抗性的分子生物学研究进展 | 第13-15页 |
| ·葡萄属植物抗白粉病基因工程研究 | 第15-18页 |
| ·抗白粉病芪合成酶基因工程 | 第15-17页 |
| ·葡萄属植物白藜芦醇 | 第15页 |
| ·芪合成酶基因的结构和功能 | 第15-16页 |
| ·芪合成酶基因工程 | 第16-17页 |
| ·抗白粉病几丁质酶基因工程 | 第17-18页 |
| ·几丁质酶的特性 | 第17页 |
| ·抗白粉病几丁质酶基因工程研究 | 第17-18页 |
| ·抗真菌基因工程策略及进展 | 第18-23页 |
| ·植物抗真菌病害基因工程的策略 | 第18页 |
| ·在植物与病原识别水平上调控而激活植物的抗病机制 | 第18-19页 |
| ·植物抗真菌基因的克隆方法 | 第19-20页 |
| ·转座子标签法 | 第19页 |
| ·图位克隆法 | 第19-20页 |
| ·导入植物防卫反应基因增强植物抗病性 | 第20页 |
| ·利用抗真菌的蛋白质 | 第20页 |
| ·植保素 | 第20页 |
| ·增强细胞壁强度 | 第20页 |
| ·导入降解或抑制病原菌致病因子的基因使植物抗病 | 第20-21页 |
| ·致病毒素的降解 | 第20-21页 |
| ·多聚半乳糖醛酸抑制蛋白(PGIP) | 第21页 |
| ·抗真菌蛋白 | 第21页 |
| ·几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因及其应用 | 第21-23页 |
| ·几丁质酶和葡聚糖酶基因的特性和分类 | 第22页 |
| ·几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因在植物基因工程中的应用 | 第22-23页 |
| ·植物遗传转化方法 | 第23-29页 |
| ·载体介导法 | 第23-27页 |
| ·农杆菌介导法 | 第23-26页 |
| ·植物病毒介导法 | 第26-27页 |
| ·直接转化法 | 第27-29页 |
| ·化学法 | 第27页 |
| ·物理法 | 第27-29页 |
| ·种质系统介导法 | 第29页 |
| ·花粉管通道法 | 第29页 |
| ·生殖细胞浸泡法 | 第29页 |
| ·胚囊、子房注射法 | 第29页 |
| ·转基因植株的检测 | 第29-32页 |
| ·标记基因的应用 | 第29-30页 |
| ·选择标记基因 | 第29-30页 |
| ·报告基因 | 第30页 |
| ·分子检测 | 第30-31页 |
| ·分子标记 | 第30-31页 |
| ·分子杂交 | 第31页 |
| ·免疫技术 | 第31-32页 |
| ·酶联免疫法 | 第31页 |
| ·免疫荧光技术 | 第31-32页 |
| 第二部分 试验研究 | 第32-56页 |
| ·本研究的目的意义 | 第32页 |
| ·材料和方法 | 第32-40页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·酶与化学试剂 | 第32-33页 |
| ·模板与引物 | 第33页 |
| ·常用抗生素贮存液 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·目的DNA的PCR扩增 | 第35页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第35页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第35页 |
| ·中间表达载体的构建策略 | 第35-36页 |
| ·芪合成酶基因植物表达载体的构建策略 | 第36页 |
| ·采用改进冻融法将pWR-STS导入农杆菌GV3101 | 第36-37页 |
| ·菌落直接PCR鉴定 | 第37页 |
| ·工程菌pWR-STS/GV3101的保存 | 第37页 |
| ·烟草遗传转化 | 第37-40页 |
| ·无菌材料的培养 | 第37页 |
| ·培养条件 | 第37页 |
| ·烟草再生体系的建立 | 第37页 |
| ·潮霉素浓度筛选 | 第37页 |
| ·根癌农杆菌活化 | 第37-38页 |
| ·叶盘共培养法 | 第38页 |
| ·烟草遗传转化主要影响因素探讨 | 第38页 |
| ·绿色荧光蛋白检测 | 第38页 |
| ·PCR 检测 | 第38-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-50页 |
| ·PCR扩增及酶切鉴定 | 第40页 |
| ·中间表达载体pWR306的构建及鉴定 | 第40-42页 |
| ·芪合成酶基因植物表达载体的构建及鉴定 | 第42-45页 |
| ·根癌农杆菌的转化及鉴定 | 第45页 |
| ·转化体筛选及植株再生 | 第45-48页 |
| ·潮霉素选择压力的确定 | 第45-46页 |
| ·预培养对烟草在转化中叶片分化的影响 | 第46页 |
| ·工程菌菌液浓度对转化的影响 | 第46-47页 |
| ·农杆菌感染时间对遗传转化的影响 | 第47页 |
| ·乙酰丁香酮处理方式不同对转化的影响 | 第47-48页 |
| ·GFP检测 | 第48页 |
| ·转化幼苗的PCR检测 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-54页 |
| ·引物设计策略 | 第50页 |
| ·芪合成酶基因表达载体构建策略 | 第50-51页 |
| ·菌落直接PCR鉴定筛选重组子 | 第51页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草转化 | 第51-52页 |
| ·GFP在转基因检测中的应用 | 第52-54页 |
| ·结论及展望 | 第54-56页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·问题及展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 图版 | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |