| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-39页 |
| 1 研究背景及综述 | 第14-39页 |
| ·天然产物的获得与应用是与植物病害斗争的一项重要措施 | 第14-27页 |
| ·生物中对植物抗病具有控制活性的蛋白质质 | 第15-23页 |
| ·对植物病原物具有直接抑制作用的异源蛋白质 | 第15-16页 |
| ·植物-病原物互作系统中与植物抗病相关的蛋白质 | 第16-23页 |
| ·抗病毒活性蛋白质的来源和作用 | 第23-27页 |
| ·微生物来源的抗病毒活性蛋白质 | 第24页 |
| ·植物来源的抗病毒活性蛋白质 | 第24-27页 |
| ·其它来源的抗病毒活性蛋白质 | 第27页 |
| ·海藻中蕴藏着丰富的天然产物 | 第27-33页 |
| ·具有抗病原物活性的小分子次生代谢产物 | 第28-29页 |
| ·抗植物抗病原物活性的蛋白质 | 第29-33页 |
| ·海藻凝集素的种类 | 第29-32页 |
| ·海藻凝集素的活性 | 第32-33页 |
| ·基因克隆的策略和技术 | 第33-38页 |
| ·传统的基因克隆策略 | 第34页 |
| ·蓬勃发展的mRNA差异表达筛选克隆基因技术 | 第34-35页 |
| ·具有远大前景的电子克隆策略 | 第35页 |
| ·重要的通过已知基因产物克隆基因的策略 | 第35-38页 |
| ·蛋白质--基因的克隆策略 | 第35-36页 |
| ·同源克隆策略 | 第36页 |
| ·cDNA末端快速扩增技术(RACE) | 第36-38页 |
| ·本研究的目的意义、目标和研究路线 | 第38-39页 |
| 第2章 海藻中抗病原物活性蛋白初探 | 第39-62页 |
| 2 具有抗病原物活性的海藻蛋白初步测定 | 第40-62页 |
| ·材料与方法 | 第40-45页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·供试海藻 | 第40-41页 |
| ·供试真菌 | 第41页 |
| ·供试病毒及植物寄主 | 第41-42页 |
| ·所用仪器及试剂 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·供试海藻蛋白样品的提取 | 第42-43页 |
| ·海藻蛋白浸提液的制备 | 第42页 |
| ·硫酸铵分级盐析 | 第42-43页 |
| ·蛋白质离子交换层析 | 第43页 |
| ·蛋白质凝胶过滤层析 | 第43页 |
| ·抗病毒活性检测 | 第43-44页 |
| ·抑制真菌活性检测 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-59页 |
| ·海藻蛋白粗提液的活性 | 第45-51页 |
| ·抗TMV和PVY~N活性 | 第45-47页 |
| ·对真菌的作用 | 第47-51页 |
| ·羊栖菜柱蛋白质层析组分的获得和活性测定 | 第51-52页 |
| ·半叶马尾藻蛋白质离子交换柱层析组分的获得和活性测定 | 第52-57页 |
| ·阳离子交换层析 | 第52-54页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第54-55页 |
| ·蛋白组分的抗TMV作用 | 第55-56页 |
| ·蛋白组分对真菌生长的抑制效果 | 第56-57页 |
| ·沙菜蛋白柱层析分离和活性测定 | 第57-59页 |
| ·层析组分的获得 | 第57-58页 |
| ·活性测定 | 第58-59页 |
| ·结论和讨论 | 第59-62页 |
| ·海藻中抗病毒和抗真菌的蛋白质广泛存在 | 第59-60页 |
| ·通过分级盐析、柱层析等手段可获得部分纯化的活性蛋白 | 第60页 |
| ·从海藻中获取蛋白质类活性物质的可能性和重要意义 | 第60-62页 |
| 第3章 蛋白质的分离纯化和特性 | 第62-107页 |
| 3 孔石莼中抗病毒活性蛋白的分离纯化及其特性 | 第63-89页 |
| ·材料与方法 | 第63-70页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-70页 |
| ·孔石莼蛋白的粗提 | 第64-65页 |
| ·硫酸铵分级盐析 | 第65页 |
| ·离子交换层析 | 第65页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第65-66页 |
| ·蛋白质纯度测定 | 第66-67页 |
| ·SDS-PAGE分子量测定 | 第67页 |
| ·蛋白质浓度的确定 | 第67页 |
| ·蛋白质含糖量的测定 | 第67-68页 |
| ·蛋白质紫外吸收光谱 | 第68页 |
| ·蛋白质的N-端测序 | 第68-69页 |
| ·蛋白质抗病毒活性测定 | 第69页 |
| ·蛋白质对真菌的抑制作用 | 第69页 |
| ·蛋白质对PVY~N活性机制探索 | 第69-70页 |
| ·结果及分析 | 第70-85页 |
| ·孔石莼盐析蛋白的部分特性 | 第70-71页 |
| ·孔石莼中一种抗TMV活性蛋白的纯化及其特性 | 第71-77页 |
| ·DEAE柱层析 | 第71-72页 |
| ·CM柱层析 | 第72-73页 |
| ·UPCM40 SDS-PAGE和PAGE分析 | 第73-74页 |
| ·UPCM40含糖量 | 第74页 |
| ·UPCM40的紫外吸收光谱 | 第74-75页 |
| ·UPCM40对TMV的抑制效果 | 第75-76页 |
| ·UPCM40对真菌的抑制效果 | 第76-77页 |
| ·孔石莼中一种含铜金属蛋白具有抗PVY~N活性 | 第77-85页 |
| ·蛋白质DEAE层析组分的凝胶过滤层析分离 | 第77-78页 |
| ·蛋白质的分子量检测和亚基分析 | 第78-79页 |
| ·蛋白质的紫外吸收特征 | 第79页 |
| ·UPG75的含糖量 | 第79-80页 |
| ·UPG75的抗病毒活性 | 第80页 |
| ·UPG75的N端氨基酸序列 | 第80-82页 |
| ·UPG75的抗PVY~N活性机制 | 第82-85页 |
| ·结论与讨论 | 第85-89页 |
| ·UPCM40和UPG75的获得 | 第85-86页 |
| ·铜离子和金属蛋白 | 第86-87页 |
| ·抗病毒机制 | 第87-89页 |
| 4 多酚氧化酶(Polyphenol oxidase，PPO)--海藻中另一种含铜离子并与抗病相关蛋白质的特性 | 第89-107页 |
| ·材料与方法 | 第89-91页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·方法 | 第90-91页 |
| ·酶液制备 | 第90页 |
| ·PPO活力的测定 | 第90页 |
| ·底物浓度与PPO活力的关系 | 第90页 |
| ·温度对PPO活力的影响 | 第90-91页 |
| ·酶的热稳定性测定 | 第91页 |
| ·不同酸碱度对酶活力的影响 | 第91页 |
| ·抑制剂对PPO活力的影响 | 第91页 |
| ·结果及分析 | 第91-104页 |
| ·几种海藻PPO的存在和活性检测 | 第91-92页 |
| ·羊栖菜(sargassum fusiforme)多酚氧化酶的特性 | 第92-96页 |
| ·底物浓度对PPO活力的影响 | 第92-94页 |
| ·温度对PPO活力的影响 | 第94页 |
| ·PPO热稳定性 | 第94-95页 |
| ·pH对PPO活力的影响 | 第95-96页 |
| ·抑制剂对PPO活力的影响 | 第96页 |
| ·铁钉菜(Ishige okamurai)多酚氧化酶的特性 | 第96-100页 |
| ·底物浓度对PPO活力的影响 | 第96-97页 |
| ·温度对PPO活力的影响 | 第97-99页 |
| ·PPO热稳定性 | 第99页 |
| ·pH对PPO活力的影响 | 第99-100页 |
| ·抑制剂对PPO活力的影响 | 第100页 |
| ·孔石莼(Ulva pertusa)多酚氧化酶的特性 | 第100-104页 |
| ·底物浓度对PPO活力的影响 | 第100-101页 |
| ·不同酶浓度在反应体系中的酶活力表现 | 第101-102页 |
| ·温度对PPO活力的影响 | 第102-103页 |
| ·PPO热稳定性 | 第103页 |
| ·抑制剂对PPO活力的影响 | 第103-104页 |
| ·结论和讨论 | 第104-107页 |
| ·海藻中多酚氧化酶的存在 | 第104页 |
| ·海藻中多酚氧化酶的特性 | 第104-105页 |
| ·海藻多酚氧化酶的应用的可能途径和前景 | 第105-107页 |
| 第4章 基因克隆和基因特征 | 第107-139页 |
| 5 质体蓝素plastocyaninUPG75和多酚氧化酶的基因克隆 | 第108-139页 |
| ·材料与方法 | 第108-114页 |
| ·材料 | 第108-109页 |
| ·供试样品 | 第108页 |
| ·引物 | 第108-109页 |
| ·菌种与载体 | 第109页 |
| ·试剂及酶类 | 第109页 |
| ·试剂盒 | 第109页 |
| ·供试仪器 | 第109页 |
| ·方法 | 第109-114页 |
| ·样品总RNA提取 | 第109-110页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第110-111页 |
| ·RACE扩增 | 第111-112页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及DNA片段的回收 | 第112页 |
| ·连接载体 | 第112页 |
| ·氯化钙法转化 | 第112-113页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第113页 |
| ·重组克隆的酶切鉴定 | 第113-114页 |
| ·重组克隆的PCR鉴定 | 第114页 |
| ·克隆子序列的测定及分析 | 第114页 |
| ·基因或氨基酸序列比较与同源性分析 | 第114页 |
| ·结果与分析 | 第114-136页 |
| ·UPG75部分编码区的克隆 | 第114-116页 |
| ·部分编码区PCR扩增 | 第114-115页 |
| ·部分编码区PCR产物的酶切鉴定 | 第115-116页 |
| ·UPG75编码基因的5’RACE克隆 | 第116-117页 |
| ·编码基因的5’RACE克隆 | 第116-117页 |
| ·编码基因的5’RACE PCR产物的酶切鉴定 | 第117页 |
| ·UPG75编码基因的3’RACE克隆 | 第117-119页 |
| ·PPO的同源克隆 | 第119-122页 |
| ·UPG75 cDNA部分基因的特征分析 | 第122-136页 |
| ·基因序列 | 第122-123页 |
| ·开放阅读框(ORF)核苷酸序列同源性 | 第123-125页 |
| ·编码信号肽的核苷酸序列特征 | 第125-126页 |
| ·UPG75编码成熟肽的核苷酸序列特征 | 第126-127页 |
| ·UPG75成熟肽区的Cu离子结合位点特征 | 第127-132页 |
| ·UPG75氨基酸序列与其它生物的系统进化比较 | 第132-136页 |
| ·结论与讨论 | 第136-139页 |
| ·编码UPG75的基因的获得 | 第136页 |
| ·UPG75氨基酸序列的Cu离子结合区域和结合位点 | 第136-137页 |
| ·关于新基因的克隆 | 第137-139页 |
| 小结 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 攻博期间发表的论文 | 第153-154页 |
| 原创性声明 | 第154页 |
