| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-17页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 第一部分 铜抗癌机理研究 | 第18-43页 |
| 引言 | 第18页 |
| 一、实验材料与方法 | 第18-21页 |
| [一] 实验材料 | 第18-19页 |
| [二] 实验方法 | 第19-21页 |
| 1 体内抑瘤实验 | 第19-20页 |
| 2 体外细胞生长曲线及铜对细胞毒性实验 | 第20页 |
| 3 流式细胞分光光度计测量分析癌细胞细胞周期 | 第20页 |
| 4 激光共聚焦显微镜观测核酸形态的变化 | 第20-21页 |
| 5 DNA“Ladder” | 第21页 |
| 二、实验结果 | 第21-37页 |
| [一] 铜对荷瘤实验动物的抑瘤效应 | 第21-24页 |
| [二] 铜对肿瘤细胞的生长抑制 | 第24-25页 |
| [三] 铜对肿瘤细胞的直接损伤 | 第25-30页 |
| [四] 铜对腹水癌细胞H_(22)HepA细胞周期的影响 | 第30-32页 |
| [五] 铜对DNA、RNA损伤的形态学观察(AO染色) | 第32-36页 |
| [六] 铜诱导癌细胞发生凋亡 | 第36-37页 |
| 三、讨论 | 第37-41页 |
| [一] 铜的抗肿瘤作用 | 第37页 |
| [二] 铜抗肿瘤作用的机理 | 第37-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第二部分 铜与金属硫蛋白的分布、转运研究 | 第43-84页 |
| 引言 | 第43页 |
| 一、实验材料与方法 | 第43-48页 |
| [一] 实验材料 | 第43-44页 |
| [二] 实验方法 | 第44-48页 |
| 1 肝肾功能、外周血的测定 | 第44页 |
| 2 原子吸收分光光度计测定微量元素(火焰法) | 第44-45页 |
| 3 铜的化学染色(Rhodanine法) | 第45页 |
| 4 MT的免疫组织化学染色 | 第45页 |
| 5 银饱和法测定金属硫蛋白 | 第45-46页 |
| 6 金属硫蛋白的分离 | 第46页 |
| 7 锌-MT的制备 | 第46-47页 |
| 8 ~(64)Cu和~(135)Ⅰ-MT的转运和代谢 | 第47页 |
| 9 铜和H_2O_2对质粒DNA的损伤及锌-MT保护作用 | 第47-48页 |
| 二、实验结果 | 第48-77页 |
| [一] 铜对实验动物肝肾功能、外周血的影响 | 第48-49页 |
| [二] 肿瘤生长对铜分布的影响 | 第49-50页 |
| [三] 口服醋酸铜后铜在不同组织动态分布规律 | 第50-53页 |
| [四] ~(64)Cu在腹水型肝癌小鼠中的转运特点 | 第53-60页 |
| [五] 铜诱导金属硫蛋白在组织脏器中的分布特点 | 第60-64页 |
| [六] 铜与MT在细胞中的分布特点 | 第64-67页 |
| [七] 肝脏、肿瘤组织中MT金属组成特点 | 第67-71页 |
| [八] 腹腔注射MT的分布转运特点 | 第71-72页 |
| [九] 铜与过氧化氢对质粒DNA的损伤及MT的保护作用 | 第72-77页 |
| 三、讨论 | 第77-81页 |
| [一] 铜治疗实验性肿瘤过程中的的毒性 | 第77页 |
| [二] 血清铜的升高在肿瘤生长过程中的意义 | 第77-78页 |
| [三] 铜在荷瘤动物组织细胞中的分布规律 | 第78-79页 |
| [四] 铜抗肿瘤过程中MT的组织细胞分布 | 第79-80页 |
| [五] MT在肝肾、肿瘤组织中的意义 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 第三部分 MT基因表达与铜抗癌作用 | 第84-102页 |
| 引言 | 第84页 |
| 一、实验材料与方法 | 第84-90页 |
| [一] 实验材料 | 第84-85页 |
| [二] 实验方法 | 第85-90页 |
| 1 质粒的扩增与制备 | 第85-86页 |
| 2 MT-ⅡA质粒DNA片段的回收(透析袋法) | 第86页 |
| 3 脂质体Lipofectamine Reagent介导的MT-ⅡA基因转染 | 第86-87页 |
| 4 新霉素筛选转染细胞 | 第87页 |
| 5 标记探针 | 第87-88页 |
| 6 Southern Blot | 第88-89页 |
| 7 Northern Blot | 第89-90页 |
| 8 软琼脂生长实验 | 第90页 |
| 9 DNA“Ladder” | 第90页 |
| 二、实验结果 | 第90-98页 |
| [一] pBAcNeoMT-ⅡA的限制性酶切鉴定 | 第90-91页 |
| [二] 脂质体Lipofectamine Reagent介导的MT-ⅡA基因转染人7402细胞 | 第91-92页 |
| [三] 转染细胞MT的表达和形态、生长特点 | 第92-94页 |
| [四] MT对人7402肝癌细胞恶性表达的影响 | 第94-95页 |
| [五] MT对铜抗癌作用的影响 | 第95-98页 |
| [六] MT对诱导细胞凋亡的影响 | 第98页 |
| 三、讨论 | 第98-101页 |
| [一] 上调MT基因表达水平方法的评价 | 第98-99页 |
| [二] 肿瘤细胞内MT高表达可增加细胞的铜毒性 | 第99-100页 |
| [三] MT对铜离子诱导肿瘤细胞凋亡的影响 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-102页 |
| 第四部分 文献综述 | 第102-133页 |
| 一、祖国医学对微量元素铜的认识 | 第102-109页 |
| 二、微量元素铜的病理生理 | 第109-114页 |
| 三、铜、自由基与抗肿瘤 | 第114-120页 |
| 四、铜金属硫蛋白的研究 | 第120-127页 |
| 五、金属硫蛋白基因研究 | 第127-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
