重组苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶表达条件的优化及结构预测
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的概述 | 第10-13页 |
| ·不同物种丙酮酸脱氢酶复合体结构与组成 | 第10-11页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的催化机理 | 第11-12页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的调控 | 第12页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的研究进展 | 第12-13页 |
| ·原核系统表达重组蛋白条件的优化 | 第13-17页 |
| ·包涵体形成的原因 | 第14页 |
| ·增加蛋白可溶性的方法 | 第14-17页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第17-19页 |
| ·蛋白质结构预测的意义 | 第17-18页 |
| ·蛋白质结构预测的发展 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-27页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第21-22页 |
| ·质粒和菌株 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·仪器 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-27页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第22-23页 |
| ·培养基的选择 | 第23页 |
| ·细菌生长密度的测定 | 第23页 |
| ·IPTG浓度的筛选 | 第23页 |
| ·pH值的筛选 | 第23-24页 |
| ·诱导温度的筛选 | 第24页 |
| ·诱导时间的筛选 | 第24页 |
| ·可溶蛋白纯化 | 第24-25页 |
| ·洗脱物中丙酮酸脱氢酶的浓缩 | 第25页 |
| ·丙酮酸脱氢酶活性的测定 | 第25页 |
| ·丙酮酸脱氢酶含量的测定 | 第25页 |
| ·丙酮酸脱氢酶最适pH值的测定 | 第25-26页 |
| ·丙酮酸脱氢酶Km和Vmax的测定 | 第26页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶序列同源性分析 | 第26页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶一级序列分析 | 第26页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶二级结构的预测 | 第26页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶亲/疏水性预测 | 第26页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶Motif分析和预测 | 第26页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶三级结构的预测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-45页 |
| ·表达条件的优化 | 第27-34页 |
| ·不同培养基对丙酮酸脱氢酶表达量的影响 | 第27-28页 |
| ·菌体密度对丙酮酸脱氢酶表达量的影响 | 第28-29页 |
| ·培养基pH值对丙酮酸脱氢酶表达量的影响 | 第29-31页 |
| ·诱导剂浓度对丙酮酸脱氢酶表达量影响 | 第31-32页 |
| ·诱导温度对丙酮酸脱氢酶表达量的影响 | 第32-33页 |
| ·诱导时间对丙酮酸脱氢酶表达量的影响 | 第33-34页 |
| ·丙酮酸脱氢酶的大量纯化 | 第34-36页 |
| ·丙酮酸脱氢酶的纯化 | 第34-35页 |
| ·丙酮酸脱氢酶含量的测定 | 第35-36页 |
| ·丙酮酸脱氢酶活性的测定 | 第36-37页 |
| ·纯化过程酶活力测定 | 第36-37页 |
| ·优化前后酶活力的比较 | 第37页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶有关性质研究 | 第37-38页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶最适pH值 | 第37-38页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶Vmax和Km的测定 | 第38页 |
| ·苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶结构的分析 | 第38-45页 |
| ·序列同源性分析 | 第38-40页 |
| ·一级结构的分析 | 第40-41页 |
| ·二级结构的预测 | 第41-42页 |
| ·亲/疏水性预测 | 第42-43页 |
| ·Motif分析和预测 | 第43-44页 |
| ·三级结构的预测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| ·培养基优化与筛选 | 第45页 |
| ·菌体密度的影响 | 第45页 |
| ·IPTG浓度的选择 | 第45-46页 |
| ·诱导温度的选择 | 第46页 |
| ·丙酮酸脱氢酶纯化时洗脱液的优化 | 第46-47页 |
| ·结构预测 | 第47-48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录一 | 第54-55页 |
| 附录二 | 第55-56页 |
| 附录三 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
