| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 主要符号表 | 第15-17页 |
| 1 绪论 | 第17-19页 |
| 2 背景回顾 | 第19-35页 |
| ·胰腺癌的生物治疗 | 第19-21页 |
| ·免疫治疗 | 第20页 |
| ·抗血管生成治疗 | 第20页 |
| ·靶向治疗 | 第20-21页 |
| ·Wnt 通路与肿瘤 | 第21-27页 |
| ·Wnt 通路介绍 | 第21-22页 |
| ·Wnt/β-catenin 经典通路 | 第22-23页 |
| ·作用于Wnt 信号通路的拮抗剂及其作用机制 | 第23-24页 |
| ·Wnt 通路和消化道肿瘤 | 第24-26页 |
| ·Wnt/β-catenin 与靶向治疗 | 第26-27页 |
| ·趋化因子CXCR4 受体与肿瘤进展 | 第27-31页 |
| ·CXCR4 及其配体SDF-1 的结构和功能 | 第28-29页 |
| ·SDF-1/CXCR4 轴的信号传导 | 第29页 |
| ·SDF-1/CXCR4 与恶性肿瘤的生长、转移 | 第29-30页 |
| ·CXCR4 与胰腺癌 | 第30-31页 |
| ·CXCR4 及其配体在恶性肿瘤治疗中的作用 | 第31页 |
| ·CXCR4 与Wnt/β-catenin 之间的关系 | 第31-32页 |
| ·RNAi 在生物中的应用 | 第32-35页 |
| 3 Wnt/β-catenin 经典通路在胰腺癌中的体外作用研究 | 第35-54页 |
| ·前言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-45页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·细胞培养 | 第37-38页 |
| ·细胞总RNA 的提取及cDNA 合成 | 第38-40页 |
| ·Realtime-PCR 检测细胞中基因的表达 | 第40-42页 |
| ·β-catenin Exon3 突变的检测 | 第42页 |
| ·MSP 检测各目的基因甲基化状态 | 第42-44页 |
| ·5-氮杂-脱氧胞苷酸处理 | 第44页 |
| ·荧光素酶报告基因检测Wnt 经典通路的异常活化 | 第44-45页 |
| ·siRNA 转染 | 第45页 |
| ·统计学方法 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-51页 |
| ·胰腺癌细胞中Wnt/β-catenin 通路活性的变化 | 第45-46页 |
| ·胰腺癌细胞中Wnt/β-catenin 通路相关基因的表达 | 第46-47页 |
| ·β-catenin Exon3 在胰腺癌细胞中的突变 | 第47页 |
| ·Wnt 拮抗剂在胰腺癌中的表达 | 第47页 |
| ·Wnt 拮抗剂在胰腺癌中的甲基化 | 第47-49页 |
| ·5-氮杂-脱氧胞苷酸对胰腺癌细胞Wnt 拮抗剂的影响 | 第49页 |
| ·调节DKK-1 的变化对胰腺癌Wnt 通路的变化 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第53-54页 |
| 4 趋化因子受体CXCR4 在胰腺癌中的表达及与临床的关系 | 第54-68页 |
| ·前言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-61页 |
| ·研究对象 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要液体的配制 | 第55-58页 |
| ·免疫组织化学技术检测胰腺癌CXCR4、β-catenin 的表达 | 第58-59页 |
| ·Real-Time PCR 反应观察CXCR4 mRNA 在胰腺癌细胞株中的表达 | 第59页 |
| ·Western Blot 观察不同胰腺癌细胞株CXCR4 蛋白水平的表达 | 第59-61页 |
| ·统计学方法 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-66页 |
| ·CXCR4 与β-catenin 在胰腺癌中的表达 | 第61页 |
| ·CXCR4，β-catenin 表达与临床病理的关系 | 第61-63页 |
| ·CXCR4，β-catenin 的表达对胰腺癌患者预后的影响 | 第63-65页 |
| ·胰腺癌细胞中CXCR4 的表达 | 第65页 |
| ·CXCR4 蛋白水平在胰腺癌细胞中的表达 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| 5 干扰CXCR4 基因调控Wnt/β-catenin 通路在胰腺癌中作用的体外实验研究 | 第68-95页 |
| ·前言 | 第68页 |
| ·材料和方法 | 第68-81页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68-70页 |
| ·主要仪器 | 第70-71页 |
| ·主要液体的配制 | 第71页 |
| ·CXCR4 shRNA 质粒构建 | 第71-75页 |
| ·脂质体介导的pRNAT-U6.1/Neo-CXCR4 shRNA 转染Miapaca-2 细胞 | 第75-77页 |
| ·RealTime-PCR 检测CXCR4 shRNA 对CXCR4 的抑制作用 | 第77页 |
| ·Western Blot 检测CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞CXCR4 的抑制作用 | 第77-78页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 Wnt 通路的影响 | 第78-79页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞的生物学效应 | 第79-80页 |
| ·统计方法 | 第80-81页 |
| ·结果 | 第81-89页 |
| ·CXCR4 mRNA 序列的获得和siRNA 序列的设计 | 第81页 |
| ·siRNA 表达载体的构建与鉴定 | 第81-83页 |
| ·CXCR4 shRNA 转染Miapaca-2 细胞 | 第83-84页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞CXCR4 mRNA 表达的抑制作用 | 第84页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞CXCR4 蛋白表达的抑制作用 | 第84-85页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞Wnt 活性的影响 | 第85页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞Wnt 特异基因的作用影响 | 第85-87页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞细胞增殖的影响 | 第87页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞细胞周期的影响 | 第87-88页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞克隆的影响 | 第88页 |
| ·特异性CXCR4 shRNA 对Miapaca-2 细胞侵袭力的影响 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-93页 |
| ·结论 | 第93-95页 |
| 6 结论与展望 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-106页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第106-107页 |
