| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 DMT1的高表达在MES23.5细胞铁聚积中的作用研究 | 第15-69页 |
| 1 前言 | 第17-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-45页 |
| ·DMT1目的基因的制备 | 第19-24页 |
| ·携带DMT1基因的腺病毒载体的构建 | 第24-29页 |
| ·重组腺病毒的包装 | 第29-30页 |
| ·重组腺病毒AdDMT1±IRE感染MES23.5多巴胺能细胞系 | 第30-32页 |
| ·Western blots | 第32-34页 |
| ·MTT法检测细胞存活率 | 第34-35页 |
| ·细胞铁含量测定 | 第35页 |
| ·细胞OH·含量和MDA含量测定 | 第35-36页 |
| ·caspase-3活性测定 | 第36页 |
| ·DNA ladder检测 | 第36-37页 |
| ·Hoechst染色 | 第37-38页 |
| ·高效液相色谱仪测定细胞内多巴胺含量 | 第38-39页 |
| ·pcDNA3.1-DMT1+IRE和pcDNA3.1-DMT1-IRE表达载体的构建 | 第39-42页 |
| ·Western blots检测转染细胞DMT1蛋白表达 | 第42页 |
| ·细胞摄铁功能检测 | 第42-43页 |
| ·流式细胞仪检测△ψm和ROS | 第43-44页 |
| ·免疫荧光的方法检测DMT1的表达 | 第44页 |
| ·统计学处理 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-60页 |
| ·免疫荧光检测DMT1+IRE和DMT1-IRE在MES23.5细胞中的表达 | 第45页 |
| ·MES23.5细胞可以将二价铁转入细胞内 | 第45-46页 |
| ·携带DMT1基因的重组腺病毒的构建 | 第46-48页 |
| ·重组腺病毒感染的MES23.5细胞高表达DMT1外源基因 | 第48-50页 |
| ·高表达DMT1的MES23.5细胞对铁的抵抗力下降 | 第50-51页 |
| ·高表达DMT1的MES23.5细胞铁孵育后细胞内铁含量增加 | 第51-52页 |
| ·高表达DMT1的MES23.5细胞铁孵育后细胞内羟自由基和MDA含量增加 | 第52页 |
| ·高表达DMT1的MES23.5细胞铁孵育后细胞出现明显的凋亡 | 第52-55页 |
| ·高表达DMT1的MES23.5细胞铁孵育后细胞内多巴胺含量降低 | 第55-56页 |
| ·pcDNA3.1-DMT1+IRE和pcDNA3.1-DMT1-IRE表达载体的构建 | 第56页 |
| ·高表达的DMT1增强calcein介导的细胞摄铁功能 | 第56-57页 |
| ·高水平的细胞内铁增加细胞内ROS的产生 | 第57-58页 |
| ·高表达DMT1的MES23.5细胞铁孵育后细胞线粒体膜电位降低 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-69页 |
| 第二章 人参皂苷Rg1对6-OHDA处理的MES23.5细胞铁聚集的作用研究 | 第69-92页 |
| 1 前言 | 第73-75页 |
| 2 材料和方法 | 第75-80页 |
| ·中药提取物 | 第75页 |
| ·阳性对照药 | 第75页 |
| ·细胞培养和细胞接种 | 第75-76页 |
| ·MTT法检测Rg1对MES23.5细胞存活率的影响 | 第76页 |
| ·RT-PCR和实时定量PCR检测目的基因的表达 | 第76-79页 |
| ·Western blots | 第79页 |
| ·细胞摄铁功能测定 | 第79-80页 |
| ·流式细胞仪检测线粒体跨膜电位 | 第80页 |
| ·统计学处理 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-87页 |
| ·Rg1对细胞存活率的影响 | 第80页 |
| ·Rg1抑制6-OHDA引起的DMT1+IRE的表达上调 | 第80-82页 |
| ·Rg1减弱6-OHDA引起的细胞摄铁功能的增加 | 第82-83页 |
| ·Rg1对DMT1+IRE的调节机制是依赖IRE/IRPs | 第83-86页 |
| ·Rg1减弱铁孵育后6-OHDA处理的MES23.5细胞的线粒体功能的损伤 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 综述 | 第101-117页 |
| 综述参考文献 | 第111-117页 |
| 附录 (缩略词表) | 第117-119页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
