| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| ·动物源细菌耐药性研究进展 | 第11-13页 |
| ·细菌耐药性检测方法研究进展 | 第13-16页 |
| ·动物源细菌对四环素类药物耐药性研究进展 | 第16-21页 |
| ·本研究的前期工作基础 | 第21页 |
| ·本研究的目的意义及创新点 | 第21-22页 |
| ·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 2. 实验材料 | 第23-25页 |
| ·实验菌株 | 第23页 |
| ·实验试剂 | 第23-24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24-25页 |
| 3. 实验方法 | 第25-35页 |
| ·样品的采集 | 第25页 |
| ·细菌的分离，纯化及鉴定 | 第25-26页 |
| ·本研究目的基因的选择及 PCR引物设计 | 第26页 |
| ·PCR扩增模板制备 | 第26-27页 |
| ·单基因PCR扩增体系的建立 | 第27页 |
| ·阳性菌株的筛选及序列测定 | 第27-28页 |
| ·PCR模板制备方法的选择和优化 | 第28-29页 |
| ·三重PCR及反应体系建立及优化 | 第29-31页 |
| ·试剂盒的组装及操作方法的建立 | 第31页 |
| ·试剂盒与其他耐药性检测方法的比较 | 第31-32页 |
| ·试剂盒敏感性试验 | 第32页 |
| ·试剂盒特异性试验 | 第32页 |
| ·试剂盒重复性试验 | 第32-33页 |
| ·试剂盒保存期试验 | 第33页 |
| ·试剂盒的外包装和内容 | 第33-34页 |
| ·试剂盒的应用 | 第34页 |
| ·试剂盒的专利申请和操作规程编制 | 第34-35页 |
| 4. 试验结果 | 第35-53页 |
| ·样品采集及细菌的分离纯化鉴定结果 | 第35页 |
| ·待扩增目的基因的选择及三重PCR引物设计结果 | 第35-36页 |
| ·单基因PCR最佳扩增参数的建立 | 第36-37页 |
| ·阳性菌株的筛选及序列分析结果 | 第37-40页 |
| ·试剂盒模板制备方法的筛选和优化结果 | 第40-41页 |
| ·三重PCR反应体系建立及优化结果 | 第41-45页 |
| ·试剂盒的组装及操作方法的建立结果 | 第45-47页 |
| ·试剂盒与其他耐药性检测方法的比较结果 | 第47页 |
| ·试剂盒敏感性试验结果 | 第47-48页 |
| ·试剂盒特异性试验结果 | 第48-49页 |
| ·试剂盒重复性试验结果 | 第49页 |
| ·试剂盒保存期试验结果 | 第49-50页 |
| ·试剂盒的外包装和内容的确定 | 第50页 |
| ·试剂盒的应用结果 | 第50-52页 |
| ·试剂盒专利申报和操作规程草案 | 第52-53页 |
| 5. 分析与讨论 | 第53-60页 |
| ·关于扩增目的基因的选择 | 第53页 |
| ·关于多重引物设计原则 | 第53-54页 |
| ·关于PCR反应模板制备方法的筛选与优化 | 第54页 |
| ·关于三重PCR反应方法建立和优化的影响因素 | 第54-56页 |
| ·试剂盒与其他检测方法的比较 | 第56-57页 |
| ·关于试剂盒敏感性的影响因素 | 第57页 |
| ·关于试剂盒重复性影响因素 | 第57-58页 |
| ·关于试剂盒的保存期的影响因素 | 第58页 |
| ·关于试剂盒的应用 | 第58-60页 |
| 6. 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附件 | 第66-76页 |
| 附件1: 四环素类药物耐药基因三重PCR检测试剂盒操作规程草案 | 第66-73页 |
| 附件2 试剂盒操作说明书 | 第73-76页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第76页 |