| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.HSP的研究进展 | 第13-21页 |
| ·HSP的种类 | 第14页 |
| ·热激反应的时间 | 第14-15页 |
| ·HSP的功能 | 第15-19页 |
| ·HSP具有分子伴侣作用 | 第15-16页 |
| ·HSP与植物的耐热性 | 第16-17页 |
| ·HSP与植物的抗冷性 | 第17-18页 |
| ·HSP在植物发育中的作用 | 第18-19页 |
| ·HSP基因启动子结构特征 | 第19页 |
| ·HSP基因的表达调控 | 第19-21页 |
| 2.基因克隆方法研究进展 | 第21-27页 |
| ·图位克隆 | 第21页 |
| ·转座子标签法 | 第21-22页 |
| ·功能基因克隆 | 第22-23页 |
| ·差异显示基因克隆 | 第23-26页 |
| ·差异展示反转录PCR(DDRT-PCR) | 第23页 |
| ·cDNA代表性差异分析(RDA) | 第23-24页 |
| ·抑制性扣除杂交技术(SSH) | 第24-25页 |
| ·RACE技术 | 第25-26页 |
| ·PCR法获得新基因的方法 | 第26-27页 |
| ·重叠延伸PCR | 第26-27页 |
| ·连续延伸PCR法 | 第27页 |
| ·基于PCR的两步PTDS方法 | 第27页 |
| 3.芸薹属植物转基因研究进展 | 第27-33页 |
| ·农杆菌介导法转基因 | 第28-30页 |
| ·农杆菌介导遗传转化的优势 | 第28页 |
| ·影响农杆菌介导的遗传转化的主要因素 | 第28-30页 |
| ·不结球白菜转基因研究进展 | 第30-33页 |
| 第二部分 研究报告 | 第33-73页 |
| 第一章 不结球白菜热激蛋白基因克隆及表达 | 第33-53页 |
| 1.材料与方法 | 第34-45页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·各种酶类 | 第34页 |
| ·试剂盒 | 第34页 |
| ·常用储液 | 第34页 |
| ·Southern杂交所需溶液及物品 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-45页 |
| ·植物材料的准备 | 第35页 |
| ·基因组DNA,总RNA的提取 | 第35页 |
| ·单链cDNA的合成 | 第35-36页 |
| ·引物的设计 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增 | 第37页 |
| ·3'RACE | 第37页 |
| ·5'RACE | 第37-40页 |
| ·目的片段的回收及克隆 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·序列测定及分析 | 第41页 |
| ·Southern杂交分析 | 第41-42页 |
| ·实时定量PCR分析 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌细胞活力实验 | 第43-45页 |
| 2.结果与分析 | 第45-51页 |
| ·不结球白菜总RNA的提取 | 第45页 |
| ·不结球白菜BcHSP基因RT-PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·不结球白菜BcHSP基因cDNA全长的拼接及序列分析 | 第46-47页 |
| ·不结球白菜BcHSP基因的同源性分析 | 第47-48页 |
| ·Southern杂交检测BcHSP基因的拷贝数 | 第48页 |
| ·热激诱导BcHSP基因转录表达分析 | 第48-49页 |
| ·pET-BcHSP转基因大肠杆菌的检测 | 第49-50页 |
| ·BcHSP的转化对大肠杆菌在37℃条件下的生长没有影响 | 第50页 |
| ·细胞活力测定结果 | 第50-51页 |
| ·异源表达BcHSP基因提高大肠杆菌在高温胁迫下的生存能力 | 第50-51页 |
| ·异源表达BcHSP基因提高大肠杆菌在低温胁迫下的生存能力 | 第51页 |
| 3.讨论 | 第51-53页 |
| 第二章 热激诱导不结球白菜BcHSP基因合成与耐冷性分析 | 第53-63页 |
| 1.材料与方法 | 第54-57页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·菌株与质粒 | 第54页 |
| ·试剂盒 | 第54页 |
| ·酶和生化试剂 | 第54页 |
| ·常用储液 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·植物材料的准备 | 第54-55页 |
| ·总RNA的提取 | 第55页 |
| ·半定量PCR分析方法 | 第55页 |
| ·热激、低温及恢复后耐冷性鉴定 | 第55页 |
| ·热激、低温及恢复后生理指标测定 | 第55-57页 |
| ·实时定量PCR检测BcHSP转录表达特点 | 第57页 |
| ·大肠杆菌细胞活力实验 | 第57页 |
| 2.结果与分析 | 第57-60页 |
| ·半定量PCR分析结果 | 第57-58页 |
| ·热激对不结球白菜幼苗细胞膜伤害和酶活性影响 | 第58-60页 |
| ·温度胁迫后和恢复生长过程中不结球白菜幼苗中BcHSP的合成 | 第60页 |
| ·异源表达BcHSP基因提高大肠杆菌在低温胁迫下的生存能力 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 不结球白菜BcHSP基因植物过量表达载体的构建及其转基因功能初步鉴定 | 第63-73页 |
| 1.材料和方法 | 第63-68页 |
| ·植物过量表达载体的构建 | 第63-66页 |
| ·植物材料和质粒 | 第63页 |
| ·酶和试剂 | 第63-64页 |
| ·RNA的提取 | 第64页 |
| ·目的基因的克隆 | 第64页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-BcHSP构建 | 第64-65页 |
| ·植物表达载体质粒转化农杆菌 | 第65-66页 |
| ·植物材料的培养和转化 | 第66-67页 |
| ·农杆菌侵染液的准备 | 第66页 |
| ·外植体的预培养,侵染和共培养 | 第66-67页 |
| ·不定芽再生,筛选和植株形成 | 第67页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第67-68页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第67-68页 |
| ·DNA提取及PCR检测 | 第68页 |
| 2.结果与分析 | 第68-71页 |
| ·叶片总RNA的提取 | 第68页 |
| ·植物过量表达载体pCAMBIA2301-BcHSP构建 | 第68-69页 |
| ·GUS瞬时表达检测 | 第69-70页 |
| ·转甚因植株PCR鉴定 | 第70-71页 |
| 3.讨论 | 第71-73页 |
| 全文结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 论文发表情况 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
