| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| ·水稻条纹病毒的研究概况 | 第13-16页 |
| ·水稻条纹叶枯病概况 | 第13-15页 |
| ·水稻抗性研究进展 | 第15-16页 |
| ·水稻抗病品种的选育 | 第15页 |
| ·水稻抗RSV 基因工程研究 | 第15-16页 |
| ·植物生长素信号传导研究进展 | 第16-24页 |
| ·植物生长素的基本理论 | 第16-18页 |
| ·植物生长素信号传导机制 | 第18-22页 |
| ·生长素受体蛋白与泛素降解途径 | 第18-19页 |
| ·AUX/IAA 蛋白 | 第19-20页 |
| ·ARFs 和Aux/IAA 蛋白调节生长素反应基因表达的机制 | 第20-22页 |
| ·生长素信号传导对寄主与病原物互作的影响 | 第22-24页 |
| ·植物转基因技术与基因功能研究 | 第24-26页 |
| ·植物转基因技术 | 第24-26页 |
| ·农杆菌介导的转基因技术 | 第24-25页 |
| ·转基因技术应用 | 第25-26页 |
| ·利用转基因技术研究基因功能 | 第26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 RSV 侵染水稻过程中OsIAA6 基因表达量的验证 | 第28-36页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·植物材料和病毒毒源 | 第28页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·水稻种子处理与育苗 | 第28页 |
| ·RSV 病毒接种 | 第28-29页 |
| ·水稻悬浮细胞培养与RSV 侵染 | 第29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·总RNA 提取及反转录 | 第29-30页 |
| ·Real-time PCR 检测及标准曲线的建立 | 第30-31页 |
| ·数据分析 | 第31页 |
| ·结果分析 | 第31-34页 |
| ·用Real-time RT-PCR 检测的引物特异性分析 | 第31-32页 |
| ·标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| ·RSV 侵染水稻悬浮细胞过程中OsIAA6 基因的表达变化 | 第33-34页 |
| ·RSV 侵染水稻植株发病过程中OsIAA6 基因的表达变化 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 OsIAA6 基因的克隆与植物表达载体构建 | 第36-47页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·植物材料、菌种与载体 | 第36页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第36-37页 |
| ·研究方法 | 第37-43页 |
| ·水稻OsIAA6 基因的克隆 | 第37-40页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·总RNA 提取及反转录PCR | 第37-38页 |
| ·DNA 片段的割胶回收 | 第38页 |
| ·PCR 扩增产物和pMD18-T 克隆载体的连接 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·连接反应物对宿主感受态细胞的转化 | 第39页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第39页 |
| ·重组克隆的PCR 筛选和酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·序列测定与分析 | 第40页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·引物设计与合成 | 第40-41页 |
| ·用于表达载体构建的目的基因片段克隆 | 第41页 |
| ·质粒的酶切回收 | 第41-42页 |
| ·目的片段与表达载体连接转化 | 第42页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第42页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第42-43页 |
| ·农杆菌EH105 感受态细胞制备 | 第42页 |
| ·三种重组质粒转化农杆菌EHA105 | 第42-43页 |
| ·重组根癌农杆菌EHA105 的菌落PCR 验证 | 第43页 |
| ·结果分析 | 第43-46页 |
| ·OsIAA6 基因的RT-PCR 扩增结果 | 第43页 |
| ·OsIAA6 基因的克隆重组质粒酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·序列分析 | 第44页 |
| ·构建的植物表达载体质粒的PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第44-46页 |
| ·序列分析 | 第46页 |
| ·连接表达载体质粒转化农杆菌分析 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第四章 OsIAA6 蛋白的亚细胞定位和功能验证 | 第47-66页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·植物材料、菌种 | 第47页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第47页 |
| ·研究方法 | 第47-53页 |
| ·烟草叶片瞬时表达后亚细胞定位研究 | 第47-48页 |
| ·农杆菌浸润接种 | 第47-48页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第48页 |
| ·侵染洋葱表皮细胞瞬时表达后亚细胞定位研究 | 第48页 |
| ·农杆菌浸润接种 | 第48页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第48页 |
| ·重组根癌农杆菌叶盘侵染法转化烟草 | 第48-50页 |
| ·受体材料的准备 | 第48页 |
| ·农杆菌培养 | 第48-49页 |
| ·侵染和共培养 | 第49页 |
| ·选择培养 | 第49页 |
| ·分化与练苗移栽 | 第49页 |
| ·转基因烟草的DNA 提取 | 第49页 |
| ·转基因烟草的PCR 鉴定 | 第49页 |
| ·转基因烟草GUS 染色 | 第49-50页 |
| ·转基因烟草TMV 接种试验 | 第50页 |
| ·重组根癌农杆菌转化水稻 | 第50-53页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第50-51页 |
| ·愈伤组织的继代培养 | 第51页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第51页 |
| ·水稻愈伤组织的预培养 | 第51页 |
| ·水稻愈伤组织与农杆菌的共培养 | 第51页 |
| ·根癌农杆菌的洗除 | 第51-52页 |
| ·抗性愈伤的筛选 | 第52页 |
| ·抗性愈伤组织的分化培养 | 第52页 |
| ·转基因植株的再生及幼苗移栽 | 第52页 |
| ·转基因水稻的DNA 提取 | 第52页 |
| ·转基因水稻的PCR 鉴定 | 第52-53页 |
| ·转基因水稻的GUS 染色 | 第53页 |
| ·转基因水稻性状调查 | 第53页 |
| ·结果分析 | 第53-63页 |
| ·水稻OsIAA6 蛋白的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| ·pEGAD-OsIAA6 融合蛋白在烟草中的亚细胞定位 | 第53页 |
| ·pEGAD-OsIAA6 融合蛋白在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| ·pKYLX-OsIAA6 转化烟草的功能验证 | 第54-60页 |
| ·OsIAA6 转基因烟草抗性筛选与验证 | 第54-56页 |
| ·OsIAA6 转基因烟草表型分析 | 第56-57页 |
| ·水稻OsIAA6 基因在烟草中过量表达对TMV 复制增殖的影响 | 第57-60页 |
| ·转基因水稻抗性功能验证 | 第60-63页 |
| ·转基因水稻抗性筛选与验证 | 第60-61页 |
| ·OsIAA6 转基因水稻性状分析 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| ·水稻OsIAA6 为核定位蛋白 | 第63页 |
| ·水稻OsIAA6 基因在烟草中过量表达促进了TMV 的复制增殖 | 第63-65页 |
| ·水稻OsIAA6 基因对植株生长起抑制作用 | 第65-66页 |
| 第五章 小结与展望 | 第66-68页 |
| ·全文小结 | 第66页 |
| ·展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 主要组织培养液配方 | 第74-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
