| 缩略语表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 文献回顾 | 第18-30页 |
| 正文 | 第30-89页 |
| 实验一：酵母双杂交筛选IRE1 相互作用蛋白 | 第30-38页 |
| 1 材料 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·诱饵蛋白转化酵母与自激活检测 | 第31页 |
| ·酵母蛋白提取物的制备及Western blot检测 | 第31页 |
| ·人类睾丸cDNA文库的筛选 | 第31-32页 |
| ·酵母质粒提取及PCR筛选 | 第32页 |
| ·重复验证相互作用及生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第33页 |
| ·诱饵蛋白的转化与表达 | 第33-34页 |
| ·酵母双杂交文库筛选及阳性克隆PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·生物信息学分析及回转杂交验证 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 实验二：在体外及哺乳动物细胞内验证IRE1 与RACK1 的相互作用 | 第38-57页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| ·细胞 | 第38页 |
| 质粒 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38-39页 |
| 2. 方法 | 第39-50页 |
| ·质粒构建 | 第39-40页 |
| ·氯化铷方法制备E.Coli感受态细胞 | 第40-41页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第41-42页 |
| ·质粒中量制备 | 第42-43页 |
| ·E.co li 大批量质粒的提取 | 第43-44页 |
| ·质粒转化 | 第44页 |
| ·DNA重组 | 第44-45页 |
| ·谷胱甘肽 (GST)融合蛋白的制备 | 第45-46页 |
| ·GST pulldown实验 | 第46-47页 |
| ·免疫沉淀 | 第47-48页 |
| ·免疫印迹(Western blot) | 第48页 |
| ·磷酸钙法转染 | 第48-49页 |
| ·脂质体法转染一将质粒DNA导入培养细胞中 | 第49页 |
| ·免疫荧光 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-55页 |
| ·体外GST Pulldown实验证实RACK1 可与IRE1C端相互作用 | 第50-53页 |
| ·免疫共沉淀显示IRE1 与RACK1 可在体内形成复合物 | 第53-54页 |
| ·免疫荧光显示IRE1 与RACK1 在细胞内有共定位 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 实验三：RNAI技术敲除RACK1 表达对IRE1 功能的影响 | 第57-68页 |
| 1 材料 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| ·脂质体法转染一将siRNA导入培养细胞中 | 第57-58页 |
| ·蛋白印迹（Western blot）(见实验二) | 第58页 |
| ·RT-PCR法检测XBP-1 的剪切 | 第58-59页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡 | 第59-60页 |
| ·统计学方法 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-66页 |
| ·Si RNA 敲除RACK1 表达可抑制 ER stress下IRE1 的活化 | 第60-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-89页 |
| 个人简历和研究成果 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
