| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-23页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性的提出 | 第14-15页 |
| ·RNA 介导病毒抗性的特点和性质 | 第15-16页 |
| ·RNA 沉默的组分 | 第16-21页 |
| ·RdRP （RNA-dependent RNA polymerase） | 第16-17页 |
| ·Dicer 酶 | 第17-19页 |
| ·RNA 诱导的沉默复合体（RISC） | 第19-20页 |
| ·PTGS 的辅助蛋白 | 第20-21页 |
| ·hpRNA 与RNAi（RNA 介导的病毒抗性） | 第21-22页 |
| ·本研究的立题依据和主要研究内容 | 第22-23页 |
| ·立题依据 | 第22页 |
| ·本研究主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-42页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·毒源 | 第23页 |
| ·供试植物 | 第23页 |
| ·菌株、质粒 | 第23页 |
| ·常用缓冲液及培养基的配制 | 第23页 |
| ·常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-42页 |
| ·PVY~N NIa-Vpg,NIa-Pro 基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·不同目的片段的获得 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第24-25页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第25-32页 |
| ·400bp 片段和pROKII 质粒的酶切 | 第25-27页 |
| ·400bp 片段与pROKII 质粒的连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA 向大肠杆菌中转化（热激法） | 第28页 |
| ·转化菌落PCR鉴定 | 第28页 |
| ·质粒DNA 的大量提取（碱裂解法） | 第28-30页 |
| ·重组质粒 PCR 鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·500bp 片段与重组质粒 DNA pROK Ⅱ +400bp 的连接 | 第31页 |
| ·重组质粒向大肠杆菌的转化（热激法） | 第31页 |
| ·重组质粒转化菌落的PCR 鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒 DNA 的大量提取（碱裂解法） | 第31页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒向农杆菌转化（冻融法） | 第32页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第32-33页 |
| ·植物总DNA 的提取（CTAB 法） | 第33页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第33页 |
| ·转基因植株的ELISA 检测 | 第33-34页 |
| ·转基因植株总RNA 的提取（Trizol 一步提取法） | 第34-35页 |
| ·Northern blot 分析 | 第35-39页 |
| ·在含有甲醛的凝胶上进行RNA 电泳 | 第35页 |
| ·转膜 | 第35-36页 |
| ·探针制备 | 第36页 |
| ·DIG 标记有效性检测 | 第36-38页 |
| ·杂交 | 第38-39页 |
| ·转基因植株siRNA 的提取及杂交分析 | 第39-42页 |
| ·转基因植株 siRNA 的提取（siRNA 提取试剂盒） | 第39-40页 |
| ·siRNA 电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳） | 第40页 |
| ·siRNA 转膜（电转膜） | 第40-41页 |
| ·siRNA 探针的制备 | 第41页 |
| ·siRNA 杂交 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-57页 |
| ·马铃薯Y 病毒NIa-Vpg，NIa-Pro 的克隆 | 第42页 |
| ·目的片段的扩增和酶切 | 第42-43页 |
| ·质粒DNA 酶切和回收 | 第43页 |
| ·hpRNA 结构植物表达载体的构建 | 第43-49页 |
| ·重组中间载体pROKⅡ+400bp 的菌落PCR 鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组中间载体pROKⅡ+400bp 质粒的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·植物表达载体的菌落PCR 鉴定 | 第46-48页 |
| ·植物表达载体的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·转化植株的获得 | 第49页 |
| ·转化植株的PCR 检测 | 第49-51页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第51-54页 |
| ·转基因植株的Northern blot 分析 | 第54-55页 |
| ·转基因植株siRNA 的杂交分析 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-75页 |
| 附录Ⅰ 常用缓冲液及培养基的配制 | 第75-80页 |
| 附录Ⅱ 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第80-82页 |
| 附录III 质粒图谱 | 第82-83页 |
| 附录Ⅳ cDNA 的序列测定结果：Gene Bank 登陆号为 EU182576 6K2、NIa-Vpg： 720bp | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
