| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 PCV 的分类地位 | 第15页 |
| 2 病原学特征 | 第15-18页 |
| ·PCV 的理化特征 | 第15-16页 |
| ·PCV的细胞培养特征 | 第16页 |
| ·病毒基因组结构 | 第16-17页 |
| ·病毒的编码蛋白 | 第17-18页 |
| ·Rep 蛋白 | 第17页 |
| ·Cap 蛋白 | 第17-18页 |
| 3 流行病学 | 第18-23页 |
| ·猪圆环病毒的流行情况 | 第18-20页 |
| ·病毒传播方式及途径 | 第20-21页 |
| ·致病机理 | 第21-23页 |
| 4 与 PCV-2 有关的疾病 | 第23-26页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合征 | 第23-24页 |
| ·猪皮炎肾病综合征 | 第24页 |
| ·A2 型先天性震颤 | 第24-25页 |
| ·繁殖障碍 | 第25页 |
| ·猪增生性和坏死性肺炎 | 第25页 |
| ·猪呼吸道病复合征 | 第25-26页 |
| 5 检测方法 | 第26-32页 |
| ·PCV 的检测 | 第26-30页 |
| ·病毒分离及电镜观察 | 第26页 |
| ·病毒抗原的检测 | 第26-28页 |
| ·间接免疫荧光实验(Immunofluorescence assay ,IFA) | 第26-27页 |
| ·免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC) | 第27页 |
| ·核酸探针及原位杂交(Nucleic acid probe and in situ hybridization,ISH) | 第27-28页 |
| ·基因组检测 | 第28-30页 |
| ·PCR（Polymerase chain reaction）诊断技术 | 第28-30页 |
| ·常规 PCR | 第28页 |
| ·多重 PCR(Multiplex PCR) | 第28-29页 |
| ·巢式 PCR(Nested-PCR) | 第29页 |
| ·竞争 PCR(Competitive PCR, c-PCR) | 第29页 |
| ·PCR 产物限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析方法 | 第29-30页 |
| ·实时 PCR（Real time PCR) | 第30页 |
| ·病毒抗体的检测 | 第30-32页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第30页 |
| ·免疫过氧化物酶单层细胞实验 | 第30-31页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第31-32页 |
| ·竞争ELISA 法 | 第31页 |
| ·间接ELISA 方法 | 第31-32页 |
| ·抗原捕获 ELISA | 第32页 |
| 6 PCV-2 的防制 | 第32-33页 |
| 7 PCV 感染性克隆的研究进展 | 第33-35页 |
| 8 本研究的目的及意义 | 第35-36页 |
| 实验一 猪圆环病毒 2 型 SDZQ-1 株全基因组的克隆与序列分析 | 第36-49页 |
| 1 材料与方法 | 第37-42页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·病料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·样品总 DNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·PCV-2 核酸片断的扩增 | 第38页 |
| ·PCV-2 扩增产物的检测 | 第38页 |
| ·PCR 产物的克隆与序列测定 | 第38-42页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第38-39页 |
| ·PCR 产物的联接 | 第39页 |
| ·TG1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·PCV2 序列分析及进化分析 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-46页 |
| ·PCV-2 核酸片段扩增结果 | 第42页 |
| ·PCR 产物的克隆与重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·PCV-2 分离株的序列测定及分析 | 第43-45页 |
| ·全基因组序列分析 | 第43-44页 |
| ·PCV-2 分离毒株系统进化树分析 | 第44-45页 |
| ·PCV-2 的ORF1 核苷酸序列及推导氨基酸序列同源性比较 | 第45-46页 |
| ·PCV2 的 ORF2 核苷酸序列及推导氨基酸序列同源性比较 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| ·病毒全基因组序列分析 | 第46-47页 |
| ·ORFs 基因及其蛋白的分析 | 第47-49页 |
| 实验二 猪圆环病毒2 型双拷贝感染性克隆的构建 | 第49-65页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| ·基因工程载体、菌株 | 第50页 |
| ·分子生物学试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-61页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·实验设计 | 第51页 |
| ·猪圆环病毒单拷贝克隆pTPCV2-EcoRΙ质粒和pUCPCV2-HindⅢ+EcoRΙ质粒的构建 | 第51-55页 |
| ·DNA 模板的制备 | 第51-52页 |
| ·猪圆环病毒SDZQ-1 株全基因序列的扩增 | 第52-53页 |
| ·PCV-2 单拷贝克隆 pUCPCV2-Hind Ⅲ +EcoRΙ 质粒构建 | 第53-54页 |
| ·pUC19 质粒的制备 | 第53页 |
| ·PCV2 全基因序列 P1P2 和pUC19 质粒酶切及回收 | 第53-54页 |
| ·PCV2 SDZQ-1 株全基因P1P2 序列和pUC19 载体的联接 | 第54页 |
| ·连接产物转化E.coli TG1 | 第54页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒 ONA 鉴定连接产物 | 第54页 |
| ·重组质粒的 PCR 与酶切鉴定 | 第54页 |
| ·pUCPCV2-HindⅢ+EcoRΙ质粒序列测定 | 第54页 |
| ·单拷贝克隆pTPCV2-EcoRΙ质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·PCV2 SDZQ-1株全基因P1P3序列和pMD18-T Simple Vector 载体的联接 | 第54-55页 |
| ·连接产物转化 E.coli TG1 | 第55页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒 ONA 鉴定连接产物 | 第55页 |
| ·重组质粒的PCR 与酶切鉴定 | 第55页 |
| ·猪圆环病毒2型双拷贝传染性克隆pUC2PCV2质粒的构建 | 第55-58页 |
| ·pUCPCV2-HindⅢ+EcoR Ι质粒和pUCPCV2-HindⅢ+EcoRΙ质粒的制备 | 第55页 |
| ·pUCPCV2-Hind Ⅲ+EcoRΙ质粒和pUCPCV2-HindⅢ+EcoRΙ质粒的酶切及回收 | 第55-56页 |
| ·pUCPCV2-Hind Ⅲ+EcoRΙ质粒割胶回收产物的去磷酸化 | 第56页 |
| ·pUCPCV2-HindⅢ+EcoRΙ质粒载体与 SDZQ-1 株全基因 P1P3序列的联接 | 第56-57页 |
| ·连接产物转化 E.coli TG1 | 第57页 |
| ·阳性质粒的签定 | 第57-58页 |
| ·菌体 PCR | 第57-58页 |
| ·重组质粒酶切签定 | 第58页 |
| ·重组质粒序列测定 | 第58页 |
| ·重组质粒pUC2PCV2的大量提取 | 第58-59页 |
| ·转染 | 第59-60页 |
| ·PCR 检测 | 第60页 |
| ·间接免疫荧光试验(IEA) | 第60-61页 |
| ·病毒全基因组克隆测序 | 第61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-63页 |
| ·PCV25DZQ-1 株的全基因序列 PCR 扩增 | 第61页 |
| ·重组质粒的 PCR 以及酶切签定 | 第61-62页 |
| ·质粒 pUC2PCV2 的转染 | 第62页 |
| ·IFA 结果 | 第62-63页 |
| ·第五代细胞病毒全基因组克隆测序 | 第63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 实验三 猪2 型圆环病毒SDZQ-1 株ORF2 基因的原核表达 | 第65-74页 |
| 1 材料与方法 | 第66-71页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·菌种和质粒 | 第66页 |
| ·分子生物学试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-71页 |
| ·目的片段的扩增、纯化与回收 | 第66-67页 |
| ·引物设计 | 第66页 |
| ·PCR 扩增 ORF2 基因 | 第66-67页 |
| ·重组 ORF2 基因原核表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·ORF2 基因和原核表达载体 PET-32a 质粒的酶切及回收 | 第67-68页 |
| ·ORF2 基因和表达载体PET-32a 的联接 | 第68页 |
| ·连接产物转化E.eoli DH5a | 第68页 |
| ·重组质粒的PCR与酶切鉴定 | 第68页 |
| ·重组融合蛋白PET-32a-ORF2 的诱导表达及检测 | 第68-71页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌 BL21-ΔE3 中的表达 | 第68-69页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第69-70页 |
| ·表达蛋白的Western blot 分析 | 第70-71页 |
| 2 结果 | 第71-73页 |
| ·PCR 扩增 ORF2 基因电泳结果 | 第71页 |
| ·重组质粒pET-32a-ORF2 的酶切鉴定 | 第71页 |
| ·重组质粒pET-32a-ORF2在宿主菌中的诱导表达 | 第71-72页 |
| ·pET-32a-ORF2 表达产物western blot 鉴定 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 个人简介 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第87页 |
