| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1. | 第13-22页 |
| ·莲藕概况 | 第13页 |
| ·营养价值 | 第13页 |
| ·药用价值 | 第13-14页 |
| ·多酚氧化酶的特性 | 第14-17页 |
| ·PPO 的生理作用 | 第14-15页 |
| ·PPO 结构特性 | 第15-16页 |
| ·多基因家族性 | 第15页 |
| ·序列保守性 | 第15页 |
| ·PPO 的分子结构 | 第15-16页 |
| ·PPO 的生化特性 | 第16页 |
| ·时空表达特异性 | 第16-17页 |
| ·抑制PPO 活性的研究进展 | 第17-20页 |
| ·物理方法 | 第17-18页 |
| ·控制温度法 | 第17页 |
| ·高压处理 | 第17页 |
| ·电场处理 | 第17-18页 |
| ·气调包装 | 第18页 |
| ·可食性涂膜 | 第18页 |
| ·化学方法 | 第18-19页 |
| ·还原剂 | 第18页 |
| ·酸化剂 | 第18-19页 |
| ·螯合剂 | 第19页 |
| ·酶抑制剂 | 第19页 |
| ·巯基化合物 | 第19页 |
| ·生物学方法 | 第19-20页 |
| ·植物提取物 | 第19页 |
| ·酶法 | 第19-20页 |
| ·基因技术 | 第20页 |
| ·发展趋势 | 第20页 |
| ·RACE 技术 | 第20-22页 |
| 2 研究背景 | 第22-23页 |
| 3 研究内容与技术路线 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第23页 |
| ·莲藕不同组织总RNA 的提取方法的确定 | 第23页 |
| ·莲藕茎尖PPO 基因的克隆及序列分析 | 第23页 |
| ·莲藕PPO 基因的表达特性 | 第23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 研究方法 | 第24-29页 |
| ·试验材料 | 第24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株及试剂 | 第24页 |
| ·试剂盒和Maker | 第24页 |
| ·引物合成与测序 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-29页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第24-25页 |
| ·以cDNA 为模板PCR 扩增 | 第25页 |
| ·RACE | 第25-26页 |
| ·5' or 3'-RACE-Ready cDNA 的制备 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增 | 第26页 |
| ·胶回收纯化DNA | 第26-27页 |
| ·目的片段与PGM-T-vector 的连接 | 第27页 |
| ·CaCl_2 法——大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·连接产物的转化与蓝白斑筛选 | 第27-29页 |
| 第三章 莲藕不同组织总RNA 提取方法的确定 | 第29-35页 |
| ·材料与方法 | 第29-31页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·提取莲藕RNA 的方法 | 第29-31页 |
| ·Trizol 法 | 第29-30页 |
| ·RNAisoTM for poLysaccharide-rich pLant tissue 试剂盒提取莲藕 RNA | 第30页 |
| ·多糖多酚植物总RNA 快速提取试剂盒(Biotake)提取莲藕RNA | 第30页 |
| ·CTAB-LiCL 法提取莲藕 RNA | 第30-31页 |
| ·电泳分析 | 第31页 |
| ·总RNA 含量和纯度的测定 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 莲藕茎尖多酚氧化酶基因的克隆 | 第35-48页 |
| ·试验材料 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·试剂盒 | 第35页 |
| ·试验方法 | 第35-37页 |
| ·莲藕茎尖总RNA 的提取 | 第35页 |
| ·莲藕茎尖多酚氧化酶保守区cDNA 的克隆 | 第35页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·莲藕茎尖多酚氧化酶保守区cDNA 的RT-PCR 扩增 | 第35页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第35页 |
| ·连接与转化 | 第35页 |
| ·测序与序列分析 | 第35页 |
| ·莲藕茎尖PPO cDNA 序列的5'RACE 扩增 | 第35-36页 |
| ·引物设计和合成 | 第36页 |
| ·莲藕PPO 基因5' RACE 扩增 | 第36页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化及蓝白斑筛选 | 第36页 |
| ·测序及序列分析 | 第36页 |
| ·莲藕茎尖PPO cDNA 序列的3'RACE 扩增 | 第36-37页 |
| ·引物设计和合成 | 第36页 |
| ·莲藕PPO 基因3'RACE 扩增 | 第36页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化及蓝白斑筛选 | 第36-37页 |
| ·测序及序列分析 | 第37页 |
| ·测序结果的生物信息学分析 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-46页 |
| ·莲藕部分序列的获得 | 第37页 |
| ·莲藕PPO 5' RACE 及3' RACE 克隆及序列分析 | 第37-43页 |
| ·莲藕PPO 基因编码的蛋白质结构分析 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 莲藕多酚氧化酶基因的表达特性 | 第48-53页 |
| ·材料与方法 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·提取莲藕不同组织的RNA | 第48页 |
| ·合成第一条链cDNA | 第48页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·莲藕PPO 基因及内参基因半定量RT-PCR 循环数的确定 | 第48-49页 |
| ·相对表达含量测定 | 第49页 |
| ·数据分析 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| ·莲藕各组织RNA 的提取 | 第49-50页 |
| ·半定量循环数的确定 | 第50页 |
| ·相对表达含量测定结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第六章 总结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
