| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 引言 | 第12-18页 |
| ·老年性痴呆抗体研究的意义和必要性 | 第12-13页 |
| ·AD 发病机理 | 第12页 |
| ·抗体作用机制 | 第12-13页 |
| ·AD 免疫治疗的国内外研究现状和发展趋势 | 第13-14页 |
| ·主动免疫治疗 | 第13页 |
| ·被动免疫治疗 | 第13-14页 |
| ·AD 免疫治疗发展趋势 | 第14页 |
| ·噬菌体展示技术研究现状和发展趋势 | 第14-16页 |
| ·噬菌体抗体库的基本原理 | 第14-15页 |
| ·现有的噬菌体抗体库 | 第15-16页 |
| ·抗体库技术的发展趋势 | 第16页 |
| ·研究目的和内容 | 第16-18页 |
| ·研究目的 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 2 实验一人源性天然噬菌体抗体库构建、鉴定及 Aβ1-42寡聚体特异性单链抗体的筛选 | 第18-40页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·PCR 引物 | 第22-23页 |
| ·培养基与溶液 | 第23-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·Aβ1-42寡聚体的制备 | 第26页 |
| ·人源性噬菌体抗体库的构建 | 第26-31页 |
| ·噬菌体抗体库的富集和筛选 | 第31-32页 |
| ·Phage ELISA 鉴定阳性克隆 | 第32-33页 |
| ·实验结果 | 第33-37页 |
| ·外周血淋巴细胞总 RNA 的提取和鉴定结果 | 第33页 |
| ·全套 VH 和 VL 基因的扩增及scFv 基因的拼接和扩增 | 第33-35页 |
| ·噬菌体抗体库的鉴定 | 第35-36页 |
| ·Aβ1-42 寡聚体特异性噬菌体抗体库的富集 | 第36页 |
| ·重组噬菌体单链抗体 ELISA 鉴定 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 3 实验二 scFv 在大肠杆菌中的表达及功能鉴定 | 第40-50页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·缓冲液和培养基 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·B19 单链抗体质粒提取、鉴定和序列分析 | 第41页 |
| ·B19 单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达及鉴定 | 第41-43页 |
| ·表达产物的纯化 | 第43页 |
| ·可溶性scFv 对 Aβ_(1-42)寡聚体的特异性识别 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-48页 |
| ·B19 序列分析 | 第44-46页 |
| ·SDS-PAGE 分析 B19 在 E.coli H82151 中的表达 | 第46页 |
| ·Western Blot 分析 B19 在 E.coli H82151 中的表达 | 第46-47页 |
| ·可溶性scFv 对 Aβ1-42寡聚体的特异性识别 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 4 实验三 B19 抗体亲和力成熟的初步研究 | 第50-59页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·PCR 引物设计 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·pCom63C/cFab 载体质粒的扩增及鉴定 | 第51-52页 |
| ·B19 重链可变区和轻链可变区的扩增 | 第52页 |
| ·B19-Fab 重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·B19-Fab 重组质粒的表达及鉴定 | 第53页 |
| ·ELISA 检测 B19-Fab 重组抗体对 Aβ1-42寡聚体的特异性识别 | 第53页 |
| ·实验结果 | 第53-57页 |
| ·pCom63C/cFab 载体质粒的扩增及鉴定 | 第53-54页 |
| ·B19 抗体重链和轻链可变区的扩增 | 第54-55页 |
| ·B19-Fab 重组质粒的检测 | 第55页 |
| ·B19-Fab 重组质粒的表达和鉴定 | 第55-56页 |
| ·B19-Fab 重组抗体对 Aβ1-42 寡聚体的特异性识别 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 5 论文总结 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
