抗人ARMET单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
| 英文缩略词表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-14页 |
| 英文摘要 | 第14-18页 |
| 1 前言 | 第18-20页 |
| 2 实验材料 | 第20-23页 |
| ·动物 | 第20页 |
| ·细胞及质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| 3 方法 | 第23-39页 |
| ·ARMET 蛋白的准备 | 第23-24页 |
| ·质粒抽提 | 第23-24页 |
| ·ARMET 蛋白的诱导表达与纯化 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定重组ARMET 蛋白 | 第24-26页 |
| ·重组ARMET 蛋白的定量 | 第26页 |
| ·杂交瘤细胞株建立及mAb 制备 | 第26-32页 |
| ·SP2/0 细胞处理 | 第26-27页 |
| ·免疫方案 | 第27页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·脾细胞的处理 | 第28页 |
| ·细胞融合 | 第28-29页 |
| ·克隆转移和检测 | 第29-30页 |
| ·腹水制备 | 第30-31页 |
| ·单克隆抗体纯化 | 第31-32页 |
| ·单克隆抗体类型及亚类鉴定 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第32-33页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第33-34页 |
| ·细胞培养和质粒转染 | 第33页 |
| ·免疫荧光双标 | 第33-34页 |
| ·蛋白质印迹法 | 第34页 |
| ·制备辣根过氧化物酶结合物 | 第34-36页 |
| ·荧光素标记 | 第36-37页 |
| ·异硫氰酸荧光素标记 | 第36页 |
| ·异硫氰酸罗丹明标记 | 第36-37页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第37-38页 |
| ·免疫新西兰白兔 | 第37页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第37页 |
| ·多克隆抗体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·ELISA 检测方法的建立 | 第38-39页 |
| ·多克隆抗体稀释度的确定 | 第38页 |
| ·单克隆抗体最适包被浓度及抗兔二抗稀释度的确定 | 第38-39页 |
| ·大鼠、兔及人外周血中ARMET 水平的检测 | 第39页 |
| 4 结果 | 第39-54页 |
| ·ARMET 蛋白的诱导表达及纯化 | 第39-41页 |
| ·杂交瘤细胞株建立 | 第41-42页 |
| ·mAb 的检测 | 第42-43页 |
| ·mAb 类型及亚类的鉴定和腹水的效价测定 | 第43-44页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第44-45页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第45-47页 |
| ·辣根过氧化物酶标记单克隆抗体 | 第47页 |
| ·FITC/TRITC 标记单克隆抗体 | 第47-48页 |
| ·兔抗人ARMET 多克隆抗体制备 | 第48-49页 |
| ·双抗体夹心ELISA 检测方法的建立 | 第49-51页 |
| ·多克隆抗体稀释度的确定 | 第49-50页 |
| ·单克隆抗体最适包被浓度及抗兔二抗稀释度的确定. | 第50-51页 |
| ·ARMET ELISA 检测试剂盒的组成 | 第51页 |
| ·检测大鼠、兔及人外周血中ARMET 水平 | 第51-54页 |
| ·正常雌、雄大鼠血清中ARMET 水平检测 | 第51-52页 |
| ·脑缺血大鼠外周血中ARMET 水平检测 | 第52页 |
| ·关节炎大鼠外周血中ARMET 水平检测 | 第52-54页 |
| ·关节炎兔外周血中ARMET 水平检测 | 第54页 |
| ·人外周血中ARMET 水平检测 | 第54页 |
| 5 讨论 | 第54-58页 |
| 6 结论 | 第58-59页 |
| 7 本研究的创新点 | 第59页 |
| 8 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 综述 | 第66-78页 |
