| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-13页 |
| 缩略词注释 | 第13-14页 |
| 1 绪论 | 第14-23页 |
| ·问题的提出及研究意义 | 第14-16页 |
| ·干细胞的概念 | 第14-15页 |
| ·干细胞移植应用存在的问题 | 第15页 |
| ·本论文研究的内容及意义 | 第15-16页 |
| ·国内外研究现状 | 第16-23页 |
| ·干细胞的致瘤性 | 第16-17页 |
| ·肿瘤细胞的靶向转录 | 第17-18页 |
| ·hTERT 启动子及自杀基因在基因治疗研究中的应用 | 第18-20页 |
| ·肿瘤模型及细胞毒性实验 | 第20-23页 |
| 2 c-Myc 结合元件对hTERT 启动子的修饰 | 第23-37页 |
| ·引言 | 第23-24页 |
| ·材料与方法 | 第24-30页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·相关工具酶 | 第25页 |
| ·主要实验设备与仪器 | 第25页 |
| ·试剂配制 | 第25-27页 |
| ·修饰型hTERT 启动子设计与合成 | 第27页 |
| ·载体构建 | 第27-28页 |
| ·感受态大肠秆菌的制备 | 第28页 |
| ·质粒的转化 | 第28页 |
| ·质粒扩增提取 | 第28-29页 |
| ·细胞培养 | 第29页 |
| ·脂质体介导细胞转染 | 第29-30页 |
| ·EGFP 表达的激光共聚焦显微镜观察 | 第30页 |
| ·Luciferase 表达活性检测 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-33页 |
| ·EGFP 在端粒酶阳性细胞中的表达 | 第30-31页 |
| ·荧光素酶活性分析 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-37页 |
| ·c-Myc 元件修饰对hTERT 启动子转录活性的影响 | 第33-34页 |
| ·脂质体介导外源基因转导 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35页 |
| ·研究中存在的不足与展望 | 第35-37页 |
| 3 源于hBMSC 恶性转化细胞的扩增 | 第37-58页 |
| ·引言 | 第37-38页 |
| ·材料与方法 | 第38-40页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·试剂配制 | 第39-40页 |
| ·细胞及细胞株 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-45页 |
| ·细胞培养 | 第40-41页 |
| ·hBMSC 表型鉴定 | 第41-42页 |
| ·慢病毒转染和BPDE 诱导恶性转化 | 第42页 |
| ·BR-hBMSC 筛选培养 | 第42页 |
| ·PCR 检测 | 第42-43页 |
| ·PALA 抗性细胞筛选培养 | 第43页 |
| ·RT-PCR 测定 | 第43-44页 |
| ·Western blot 分析 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-51页 |
| ·hBMSC 细胞形态观察及表型鉴定 | 第45-47页 |
| ·慢病毒转染与BPDE 共同诱导hBMSC 恶性转化 | 第47-48页 |
| ·恶性转化细胞相关癌基因表达的检测 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| ·P53 功能缺失与细胞恶性转化 | 第51页 |
| ·慢病毒转染与细胞恶性转化 | 第51-52页 |
| ·BPDE 诱导P53 突变 | 第52-53页 |
| ·关于P53 突变的鉴定 | 第53-54页 |
| ·本节研究的不足之处 | 第54页 |
| ·本章小结 | 第54-58页 |
| 4 下调hTERT 启动子在hBMSC 中转录活性的修饰 | 第58-74页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·材料与方法 | 第59-67页 |
| ·实验材料 | 第59-61页 |
| ·实验方法 | 第61-67页 |
| ·实验结果 | 第67-71页 |
| ·荧光相差显微镜观察EGFP 表达 | 第67-68页 |
| ·荧光素酶活性分析 | 第68-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| ·c-Myc 元件修饰及hTERT 启动子的转录活性 | 第71-72页 |
| ·hTERT 启动子在骨髓间充质干细胞中的转录抑制修饰 | 第72-73页 |
| ·关于本研究的不足之处及待研究问题 | 第73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 5 体外及体内细胞毒性检测 | 第74-87页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·材料与方法 | 第75-77页 |
| ·细胞或细胞株 | 第75页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·实验仪器 | 第75页 |
| ·试剂及培养基 | 第75页 |
| ·MTT 检测 | 第75-76页 |
| ·细胞移植 | 第76页 |
| ·活体荧光检测 | 第76-77页 |
| ·结果 | 第77-80页 |
| ·细胞毒性体外实验(MTT) | 第77-78页 |
| ·恶变细胞移植存活率 | 第78页 |
| ·活体荧光体内检测 | 第78-80页 |
| ·讨论 | 第80-84页 |
| ·MTT 比色与细胞毒性检测 | 第80页 |
| ·关于细胞移植的动物模型 | 第80-82页 |
| ·活体荧光成像技术 | 第82-83页 |
| ·不足之处 | 第83-84页 |
| ·本章节小结 | 第84页 |
| ·本章附表 | 第84-87页 |
| 6 结论与工作展望 | 第87-89页 |
| ·主要结论 | 第87页 |
| ·后续工作展望 | 第87-89页 |
| ·hTERT 启动子的修饰的进一步研究 | 第87页 |
| ·临床治疗模式的研究 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 附录 作者在攻读博士学位期间所发表的论文 | 第103页 |
