| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 1 引言和文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 小鼠模式生物及心脏发育简述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 小鼠模式生物简述 | 第12页 |
| 1.1.2 小鼠胚胎心脏发育简述 | 第12-13页 |
| 1.2 先天性心脏病简述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 先心病主要类型及发生率 | 第13-14页 |
| 1.2.2 先心病发生的主要因素 | 第14-15页 |
| 1.3 流感病毒与先心病的发生 | 第15-18页 |
| 1.3.1 流感病毒介绍 | 第15-17页 |
| 1.3.2 流感病毒致心脏发育异常 | 第17-18页 |
| 1.4 WNT信号与心脏发育 | 第18-20页 |
| 1.4.1 WNT信号简述 | 第18-20页 |
| 1.5 心脏发育的基因调控 | 第20-21页 |
| 1.5.1 GATA家族与心脏发育关系 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要实验器材和耗材 | 第24页 |
| 2.1.3 质粒与菌株 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要生物信息学软件 | 第25页 |
| 2.1.5 病毒和实验动物 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 小鼠交配 | 第25页 |
| 2.2.2 母孕鼠麻醉攻毒及取材 | 第25-26页 |
| 2.2.3 RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.4 反转录 | 第26-27页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.2.6 引物设计与合成 | 第27-30页 |
| 2.2.7 常规PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.8 PCR产物纯化回收 | 第31页 |
| 2.2.9 PCR产物的连接 | 第31-32页 |
| 2.2.10 连接产物的转化和扩培 | 第32页 |
| 2.2.11 真核表达质粒提取 | 第32-33页 |
| 2.2.12 细胞免疫荧光技术 | 第33-34页 |
| 2.2.13 荧光素酶报告系统分析 | 第34页 |
| 2.2.14 LacZ报告基因检测 | 第34-35页 |
| 2.2.15 染色质免疫共沉淀 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-59页 |
| 3.1 基因筛选 | 第37-39页 |
| 3.1.1 与流感病毒互作的心脏发育调控基因筛选 | 第37-38页 |
| 3.1.2 RNA-Seq测序对心脏发育相关基因的筛选 | 第38-39页 |
| 3.2 H1N1流感病毒重组表达质粒的构建 | 第39-42页 |
| 3.2.1 pCMV-Tag2b-NS1重组表达质粒的构建 | 第39页 |
| 3.2.2 pCMV-Tag2b-PA重组表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.3 pCMV-Tag2b-HA重组表达质粒的构建 | 第40页 |
| 3.2.4 pCMV-Tag2b-NP重组表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.5 pCMV-Tag2b-NA重组表达质粒的构建 | 第41页 |
| 3.2.6 pCMV-Tag2b-M1重组表达质粒的构建 | 第41-42页 |
| 3.3 H1N1流感病毒入核实验 | 第42-43页 |
| 3.4 CHIP实验研究流感病毒与Dv12、Gata6的相互关系 | 第43-47页 |
| 3.4.1 H1N1流感病毒结合DV12和Gata6启动子 | 第43-45页 |
| 3.4.2 NS1蛋白与dv12启动子结合 | 第45-46页 |
| 3.4.3 NS1蛋白与Gata6启动子结合 | 第46-47页 |
| 3.5 流感病毒对Gata6启动子转录活性研究 | 第47-56页 |
| 3.5.1 流感病毒调控Gata6启动子上的CRE位点 | 第51-52页 |
| 3.5.2 NS1调控Gata6不同长度启动子分析 | 第52-53页 |
| 3.5.3 NS1对Gata6启动子转录活性的影响与时间有关 | 第53-56页 |
| 3.6 其他工作-H1N1流感病毒致小鼠胚胎发育畸形研究 | 第56-59页 |
| 3.6.1 H1N1流感病毒致小鼠胚胎发育迟缓 | 第56-57页 |
| 3.6.2 H1N1流感病毒致小鼠胚胎心脏及血管发育缺陷 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 5 结语 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
