| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1.前言 | 第10-12页 |
| 2.材料与方法 | 第12-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第12-15页 |
| 2.1.1 酶与试剂 | 第12-13页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第13-14页 |
| 2.1.3 质粒与菌株 | 第14页 |
| 2.1.4 培养基以及所需试剂 | 第14-15页 |
| 2.2 试验方法 | 第15-30页 |
| 2.2.1 载体的构建 | 第15-21页 |
| 2.2.1.1 重组Pgem-t-KmUOX的构建 | 第15-17页 |
| 2.2.1.2 酵母基因组的抽提方法 | 第17-19页 |
| 2.2.1.4 酶切产物或PCR或胶回收产物的纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.1.5 质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.2.1.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第21页 |
| 2.2.2 KmUOX在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21-22页 |
| 2.2.3 蛋白的分离与纯化 | 第22-25页 |
| 2.2.3.1 细胞的超声破碎 | 第22页 |
| 2.2.3.2 蛋白的纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.3.3 微晶纤维素的制作 | 第23-24页 |
| 2.2.3.4 SDS-PAGE胶电泳检测蛋白 | 第24-25页 |
| 2.2.4 KmUOX蛋白酶活及浓度的测定 | 第25-27页 |
| 2.2.4.1 Bradford 法测蛋白浓度 | 第25-26页 |
| 2.2.4.1.1 蛋白浓度标准曲线的绘制 | 第25页 |
| 2.2.4.1.2 测定蛋白浓度 | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 KmUOX酶的酶活测定 | 第26-27页 |
| 2.2.4.2.1 尿酸浓度标曲的制作 | 第26页 |
| 2.2.4.2.1 KmUOX尿酸氧化酶的酶活测定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 KmUOX酶的各种性质测定 | 第27-29页 |
| 2.2.5.1 KmUOX酶的最适温度测定 | 第27页 |
| 2.2.5.2 金属离子对KmUOX酶的影响测定 | 第27-28页 |
| 2.2.5.3 有机试剂及其他化学试剂对KmUOX酶的影响测定 | 第28页 |
| 2.2.5.4 KmUOX酶的热稳定性测试 | 第28页 |
| 2.2.5.5 KmUOX酶的PH耐受性性测试 | 第28-29页 |
| 2.2.5.6 KmUOX酶的耐热性测试 | 第29页 |
| 2.2.6 蛋白纯化条件的测试 | 第29-30页 |
| 3.实验结果 | 第30-41页 |
| 3.1 马克思克鲁维酵母的尿酸平板透明圈实验 | 第30-31页 |
| 3.2 KmUOX的与其他尿酸氧化酶的氨基酸序列比对 | 第31-32页 |
| 3.3 重组蛋白CBM3-INTEIN-KmUOX的表达 | 第32-33页 |
| 3.4 蛋白纯化条件的探索 | 第33-34页 |
| 3.5 KmUOX蛋白的纯化效率 | 第34-35页 |
| 3.6 KmUOX的最适PH及PH耐受性 | 第35-36页 |
| 3.7 KmUOX的最适合温度,及其热稳定性 | 第36-37页 |
| 3.8 金属离子与化学物质对KmUOX的影响 | 第37-39页 |
| 3.9 纯化的KmUOX的动力学常数 | 第39页 |
| 3.10 分子筛检测KmUOX | 第39-41页 |
| 4.讨论 | 第41-44页 |
| 5.总结 | 第44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 其他参与课题 | 第47-48页 |
| 附录 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-51页 |
| 课题综述 | 第51-62页 |
| 摘要 | 第51页 |
| Abstract | 第51-52页 |
| 1、尿酸的来源 | 第52-53页 |
| 2、尿酸与疾病 | 第53-55页 |
| 2.1 尿酸与冠状动脉心脏病 | 第53-54页 |
| 2.2 尿酸与糖尿病 | 第54页 |
| 2.3 尿酸与肾脏病变 | 第54页 |
| 2.4 尿酸与高血压 | 第54-55页 |
| 2.5 尿酸与痛风 | 第55页 |
| 2.6 尿酸与脑卒中 | 第55页 |
| 3、尿酸氧化酶的概述及研究进展 | 第55-58页 |
| 3.1 尿酸氧化酶的概述 | 第55-56页 |
| 3.2 目前尿酸氧化酶的研究进展 | 第56-57页 |
| 3.3 尿酸氧化酶的结构 | 第57-58页 |
| 4、尿酸氧化酶的应用 | 第58-59页 |
| 4.1 尿酸氧化酶的检测应用 | 第58-59页 |
| 4.2 尿酸氧化酶的临床应用 | 第59页 |
| 5、总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
