| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 JEV病毒的病毒学特征 | 第12-17页 |
| 1.1.1 JEV病毒的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 JEV病毒的全球分布 | 第12页 |
| 1.1.3 JEV病毒的传播途径 | 第12-13页 |
| 1.1.4 JEV病毒的多样性 | 第13页 |
| 1.1.5 JEV病毒的临床症状 | 第13-14页 |
| 1.1.6 JEV病毒的理化特性 | 第14页 |
| 1.1.7 JEV病毒的基因组结构及编码蛋白质 | 第14-16页 |
| 1.1.8 黄病毒的结构蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| 1.2 JEV病毒的复制由蛋白相互作用调控 | 第17-18页 |
| 1.2.1 非结构蛋白与胞内蛋白作用调控病毒复制 | 第17页 |
| 1.2.2 非结构蛋白相互作用调控病毒复制 | 第17-18页 |
| 1.3 黄病毒的反向遗传学技术 | 第18-20页 |
| 1.3.1 全长感染性克隆 | 第18-19页 |
| 1.3.2 亚基因组复制子 | 第19-20页 |
| 1.4 实验目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验器材 | 第21页 |
| 2.1.2 细胞系、菌株、复制子、抗体 | 第21-23页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 VEEV-PAC-2A-JEV-Cpr ME克隆构建 | 第23-29页 |
| 2.2.2 VEEV-PAC-2 A-JEV-Cpr ME体外转录RNA | 第29-31页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第31页 |
| 2.2.4 脂质体DMRIE-C转染RNA于BHK-21 细胞 | 第31页 |
| 2.2.5 电转RNA于BHK-21 细胞 | 第31-32页 |
| 2.2.6 间接免疫荧光实验 (Indirect Immunofluorescence Assay,IFA) | 第32页 |
| 2.2.7 荧光素酶Rluc活性检测 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-44页 |
| 3.1 体外转录JEV-Rluc复制子RNA | 第33页 |
| 3.2 JEV-NS5抗体验证 | 第33-34页 |
| 3.3 JEV-Rluc RNA表达验证 | 第34-35页 |
| 3.4 VEEV-JEV-Cpr ME RNA与JEV Replicon RNA互补验证 | 第35-37页 |
| 3.5 VEEV-PAC-2A-JEV-Cpr ME克隆构建 | 第37-39页 |
| 3.5.1 PAC-2A和JEV-Cpr ME基因扩增 | 第37页 |
| 3.5.2 PAC-2A和JEV-Cpr ME基因融合 | 第37-38页 |
| 3.5.3 片段与载体双酶切 | 第38页 |
| 3.5.4 菌液PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3.6 体外转录VEEV-PAC-2A-JEV-Cpr ME RNA | 第39页 |
| 3.7 VEEV-PAC-2A-JEV-Cpr ME RNA的表达验证 | 第39-40页 |
| 3.8 VEEV-PAC-2A-JEV-Cpr ME RNA与JEV Replicon RNA互补验证 | 第40-41页 |
| 3.9 电转顺次转染RNA可提高JEV VLPs产量 | 第41-42页 |
| 3.10 JEV-Cpr ME细胞系的筛选 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
