致谢 | 第6-10页 |
摘要 | 第10-12页 |
Abstract | 第12-13页 |
第一章 文献综述 | 第14-22页 |
1.1 植物与B.cinerea的互作机制 | 第14-16页 |
1.1.1 B.cinerea的侵染机制 | 第14-15页 |
1.1.2 植物PTI和ETI对B.cinerea的抗性研究 | 第15-16页 |
1.1.3 植物细胞坏死调节机制对B.cinerea的抗性研究 | 第16页 |
1.2 分子伴侣调节因子BAG家族研究进展 | 第16-21页 |
1.2.1 BAG家族的发现 | 第16-17页 |
1.2.2 植物BAG蛋白结构特征 | 第17-18页 |
1.2.3 BAG蛋白在植物抗病中的作用 | 第18-19页 |
1.2.4 BAG蛋白在植物生长发育中的作用 | 第19-20页 |
1.2.5 BAG蛋白在植物胁迫响应中的作用 | 第20-21页 |
1.3 本研究的主要目的和主要内容 | 第21-22页 |
第二章 材料与方法 | 第22-33页 |
2.1 实验材料 | 第22-23页 |
2.1.1 植物材料 | 第22页 |
2.1.2 植物材料的培养及处理 | 第22-23页 |
2.1.3 生化试剂 | 第23页 |
2.1.4 载体与菌株 | 第23页 |
2.2 实验方法 | 第23-33页 |
2.2.1 SlBAG家族基因的鉴定与命名 | 第23页 |
2.2.2 植物总RNA的提取与反转录 | 第23-24页 |
2.2.3 基因的克隆鉴定 | 第24页 |
2.2.4 荧光实时定量PCR表达分析 | 第24-25页 |
2.2.5 VIGS体系、依赖病毒的过表达番茄体系的构建 | 第25-26页 |
2.2.5.1 病毒介导的基因沉默载体和过表达载体构建 | 第25页 |
2.2.5.2 利用农杆菌转化法构建基因沉默或过表达体系 | 第25-26页 |
2.2.6 本氏烟瞬时过表达体系的建立 | 第26-27页 |
2.2.6.1 瞬时过表达载体的构建 | 第26-27页 |
2.2.6.2 用农杆菌转化法构建本氏烟瞬时过表达体系 | 第27页 |
2.2.7 蛋白质免疫印迹分析(Western blot) | 第27-28页 |
2.2.8 灰霉菌的培养与接种 | 第28-29页 |
2.2.8.1 灰霉菌的培养 | 第28页 |
2.2.8.2 灰霉菌的接种 | 第28-29页 |
2.2.8.3 灰霉菌病斑大小的统计 | 第29页 |
2.2.8.4 灰霉菌菌量的测定 | 第29页 |
2.2.9 DAB染色检测活性氧产生情况 | 第29页 |
2.2.10 台酚蓝染色检测细胞坏死情况 | 第29页 |
2.2.11 亚细胞定位 | 第29-30页 |
2.2.12 酵母筛库 | 第30页 |
2.2.13 酵母双杂验证 | 第30页 |
2.2.14 双分子荧光互补试验 | 第30-31页 |
2.2.15 Luciferase实验 | 第31页 |
2.2.16 免疫共沉淀(Co-IP)试验 | 第31-32页 |
2.2.17 化学发光法ROS测定 | 第32-33页 |
第三章 番茄SlBAG5在番茄对B.cinerea抗性中的作用 | 第33-65页 |
3.1 SlBAG家族基因的鉴定和生物信息学分析 | 第33-39页 |
3.1.1 SlBAG家族基因的鉴定 | 第33-34页 |
3.1.2 SlBAG家族成员的系统进化树构建 | 第34页 |
3.1.3 SlBAG家族成员的序列分析 | 第34-37页 |
3.1.4 SlBAG家族成员的蛋白结构域分析 | 第37-39页 |
3.2 SlBAG家族基因的表达模式分析 | 第39-43页 |
3.2.1 SlBAG家族基因组织特异性表达分析 | 第39页 |
3.2.2 SlBAG家族基因在激素诱导下的表达模式分析 | 第39-40页 |
3.2.3 SlBAG家族基因在灰霉菌诱导下的表达模式分析 | 第40-43页 |
3.3 SlBAG家族成员的亚细胞定位 | 第43-45页 |
3.4 SlBAG家族基因的抗病功能研究 | 第45-65页 |
3.4.1 沉默SlBAG5基因增强灰霉菌诱导的番茄抗病反应 | 第47-49页 |
3.4.2 在本氏烟中瞬时过表达SlBAG5基因减弱灰霉菌诱导的抗性反应 | 第49-52页 |
3.4.3 过表达SlBAG5基因减弱灰霉菌诱导的番茄抗病反应 | 第52-56页 |
3.4.4 SlBAG5基因沉默或过表达改变了灰霉菌诱导的SA、JA/ET途径响应基因的表达 | 第56-58页 |
3.4.5 SlBAG5基因沉默或过表达影响chitin介导的PTI反应 | 第58-60页 |
3.4.6 SlBAG5互作蛋白的筛选 | 第60-65页 |
第四章 小结与讨论 | 第65-69页 |
4.1 讨论 | 第65-68页 |
4.2 展望 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-75页 |
附录Ⅰ 本文引物序列 | 第75-80页 |