| 摘要 | 第5-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 符号说明 | 第15-23页 |
| 第一章 绪论NK细胞发育和功能的研究进展 | 第23-37页 |
| 1.1 引言 | 第23页 |
| 1.2 NK细胞的研究简史 | 第23-24页 |
| 1.3 多组学联合分析助力NK细胞发育和功能的研究 | 第24-28页 |
| 1.3.1 基因组学分析 | 第24-25页 |
| 1.3.2 转录组学与蛋白质组学分析 | 第25-26页 |
| 1.3.3 多组学联合分析 | 第26-28页 |
| 1.4 NK细胞表型的多样性 | 第28-30页 |
| 1.5 NK细胞功能的多样性 | 第30-32页 |
| 1.5.1 NK细胞的抗肿瘤、抗病毒功能 | 第30-31页 |
| 1.5.2 NK细胞的免疫调节功能 | 第31页 |
| 1.5.3 NK细胞促进胚胎植入的功能 | 第31-32页 |
| 1.6 NK细胞的发育和成熟 | 第32-37页 |
| 1.6.1 NK细胞发育的微环境 | 第32-33页 |
| 1.6.2 NK细胞发育和成熟的程序化 | 第33-34页 |
| 1.6.3 细胞因子促进NK细胞发育和成熟 | 第34-35页 |
| 1.6.4 生长促进因子促进NK细胞发育和成熟 | 第35页 |
| 1.6.5 转录因子调控NK细胞发育和成熟 | 第35-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-44页 |
| 2.1.1 临床标本 | 第37页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第37页 |
| 2.1.3 细菌培养及相关试剂 | 第37页 |
| 2.1.4 RNA体外转录质粒及相关试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.5 质粒及抽提、转染试剂 | 第38页 |
| 2.1.6 细胞电核转试剂 | 第38页 |
| 2.1.7 细胞系及培养基 | 第38页 |
| 2.1.8 细胞因子及生长促进因子 | 第38-39页 |
| 2.1.9 抗体 | 第39-41页 |
| 2.1.10 细胞分离和纯化试剂 | 第41页 |
| 2.1.11 总RNA提取和RT-PCR试剂 | 第41页 |
| 2.1.12 核酸序列 | 第41-43页 |
| 2.1.13 PCR试剂和核酸电泳试剂 | 第43页 |
| 2.1.14 荧光定量PCR试剂 | 第43页 |
| 2.1.15 SDS-PAGE电泳和Western blotting试剂 | 第43页 |
| 2.1.16 免疫荧光及流式内标检测试剂 | 第43页 |
| 2.1.17 蛋白纯化试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.18 NK细胞ChIP实验试剂 | 第44页 |
| 2.1.19 荧光素报告实验试剂 | 第44页 |
| 2.1.20 DNA-pull down实验试剂 | 第44页 |
| 2.2 实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-57页 |
| 2.3.1 人单个核细胞分离及NK细胞纯化 | 第45-46页 |
| 2.3.2 小鼠组织单个核细胞分离 | 第46页 |
| 2.3.3 人NK细胞纯化及基因芯片数据分析 | 第46-47页 |
| 2.3.4 细胞总RNA提取和RT-PCR | 第47页 |
| 2.3.5 荧光定量PCR | 第47页 |
| 2.3.6 流式细胞术 | 第47-48页 |
| 2.3.7 免疫荧光实验 | 第48-49页 |
| 2.3.8 细胞干扰和过表达实验 | 第49页 |
| 2.3.9 基因编辑小鼠构建 | 第49-50页 |
| 2.3.10 NK细胞相关基因保守性分析 | 第50页 |
| 2.3.11 PBX1蛋白的表达和纯化 | 第50-52页 |
| 2.3.12 PBX1的抗体制备 | 第52页 |
| 2.3.13 人脐血干细胞纯化及NK细胞体外分化扩增 | 第52页 |
| 2.3.14 细胞Western blotting | 第52-53页 |
| 2.3.15 NK细胞ChIP-Seq实验 | 第53页 |
| 2.3.16 荧光素酶报告实验 | 第53-54页 |
| 2.3.17 DNA-pull down实验 | 第54页 |
| 2.3.18 骨髓嵌合体小鼠模型 | 第54页 |
| 2.3.19 小鼠骨髓细胞混合转输模型 | 第54-55页 |
| 2.3.20 统计学分析 | 第55-57页 |
| 第三章 NK细胞产生生长促进因子促进胚胎发育 | 第57-79页 |
| 3.1 引言 | 第57页 |
| 3.2 基因芯片差异分析子宫trNK细胞和外周血NK细胞 | 第57-60页 |
| 3.2.1 子宫NK细胞与外周NK细胞基因表达谱存在显著差异 | 第58页 |
| 3.2.2 子宫CD49a~+NK细胞表达多种生长促进因子 | 第58-60页 |
| 3.3 子宫NK细胞分泌生长促进因子PTN和OGN | 第60-64页 |
| 3.3.1 子宫CD49a~+ NK细胞表达PTN和OGN等生长促进因子 | 第60-62页 |
| 3.3.2 子宫CD11b~-CD27~-NK细胞和trNK细胞表达生长促进因子 | 第62-64页 |
| 3.4 HLA-G诱导NK细胞分泌生长促进因子 | 第64-68页 |
| 3.4.1 HLA-G+绒毛外滋养层细胞促进NK细胞分泌生长促进因子 | 第64-66页 |
| 3.4.2 HLA-G-ILT2-KIR2DL4互作促进NK细胞分泌生长促进因子 | 第66-68页 |
| 3.5 异常发育的胚胎HLA-G表达量显著降低 | 第68-69页 |
| 3.6 反复流产病人NK细胞分泌生长促进因子能力显著降低 | 第69-73页 |
| 3.6.1 反复流产病人产生生长促进因子的NK细胞功能亚群显著减少 | 第70-71页 |
| 3.6.2 反复流产病人NK细胞表达生长促进因子的能力显著下降 | 第71-73页 |
| 3.7 Ptn~(-/-)Ogn~(-/-)Spp1~(-/-)小鼠胚胎发育受限 | 第73-76页 |
| 3.7.1 Ptn~(-/-)Ogn~(-/-)Spp1~(-/-)小鼠构建及验证 | 第73-75页 |
| 3.7.2 Ptn~(-/-)Ogn~(-/-)Spp1~(-/-)小鼠胚胎发育受限 | 第75-76页 |
| 3.8 讨论与总结 | 第76-79页 |
| 第四章 PBX1促进NK细胞在骨髓中的发育成熟 | 第79-111页 |
| 4.1 引言 | 第79-80页 |
| 4.2 生长促进因子支持NK细胞成熟 | 第80-86页 |
| 4.2.1 NK细胞发育过程中表达生长促进因子 | 第80-82页 |
| 4.2.2 Ptn~(-/-)Ogn~(-/-)小鼠模型证明生长促进因子促进NK细胞在骨髓成熟 | 第82-83页 |
| 4.2.3 骨髓混合转输模型证明PTN和OGN促进NK细胞在骨髓成熟 | 第83-85页 |
| 4.2.4 骨髓成熟NK细胞表达生长促进因子受体RPTP-β | 第85-86页 |
| 4.3 PBX1是NK细胞一个高度保守的转录因子 | 第86-91页 |
| 4.3.1 PBX1在物种进化过程中高度保守 | 第86-87页 |
| 4.3.2 PBX1在人骨髓NK细胞中高表达 | 第87-88页 |
| 4.3.3 PBX1在骨髓CD11b~+单阳性NK细胞中高表达 | 第88-91页 |
| 4.4 PBX1促进NK细胞表达PTN和OGN | 第91-94页 |
| 4.4.1 生物信息学预测PTN和OGN是PBX1的靶基因 | 第91-92页 |
| 4.4.2 在NK细胞中干扰PBX1表达抑制PTN和OGN表达 | 第92-93页 |
| 4.4.3 在NK细胞分化体系中过表达PBX1促进PTN和OGN表达 | 第93-94页 |
| 4.5 PBX1直接结合PTN和OGN启动子促进其转录 | 第94-97页 |
| 4.5.1 CHIP-seq结果证明在PTN和OGN启动子区有PBX1结合峰 | 第94-95页 |
| 4.5.2 荧光素酶报告实验验证PBX1结合PTN和OGN启动子区 | 第95-96页 |
| 4.5.3 DNA-pulldown验证PBX1结合PTN和OGN启动子中特异性序列 | 第96-97页 |
| 4.6 Pbx1缺陷小鼠NK细胞数量严重减少 | 第97-101页 |
| 4.6.1 骨髓嵌合体小鼠模型证明Pbx1促进NK细胞发育 | 第99-100页 |
| 4.6.2 Pbx1条件型敲除小鼠模型证明Pbx1促进NK细胞发育 | 第100-101页 |
| 4.7 PBX1促进NK细胞在骨髓的成熟 | 第101-103页 |
| 4.7.1 Pbx1条件型敲除小鼠模型证明PBX1促进NK细胞成熟 | 第101-102页 |
| 4.7.2 PTN/OGN恢复实验证明PBX1-PTN/OGN轴促进NK细胞成熟 | 第102-103页 |
| 4.8 PBX1-PTN/OGN轴通过上调T-bet表达促进NK细胞成熟 | 第103-107页 |
| 4.8.1 PBX1-PTN/OGN轴促进骨髓NK细胞的增殖和迁出骨髓能力 | 第105-106页 |
| 4.8.2 PBX1-PTN/OGN轴上调骨髓NK细胞转录因子T-bet的表达 | 第106-107页 |
| 4.9 讨论与总结 | 第107-111页 |
| 参考文献 | 第111-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 攻读博士学位期间的主要研究成果 | 第129-131页 |
| 附录 | 第131-132页 |
