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永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子对细胞增殖的影响

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
中英文缩略词表第13-15页
1 前言第15-18页
2 材料与方法第18-36页
    2.1 材料第18-22页
        2.1.1 细胞来源第18页
        2.1.2 实验试剂第18-19页
        2.1.3 主要仪器第19-20页
        2.1.4 主要试剂配置第20-22页
    2.2 方法第22-36页
        2.2.1 方法流程图第22-23页
        2.2.2 细胞培养第23-24页
        2.2.3 RT-PCR检测永生化食管上皮细胞系SHEE及其恶变细胞系SHEEC中核干细胞因子NS、Cyclin B1、PTEN m RNA的表达第24-28页
        2.2.4 Western blot检测各组中目的基因的蛋白表达情况第28-31页
        2.2.5 细胞转染第31-34页
        2.2.6 PI染色检测细胞周期第34页
        2.2.7 Annexin V-FITC/PI双染法检测NS沉默前后对SHEEC细胞凋亡率的影响 .第34-35页
        2.2.8 MTT法检测NS沉默前后细胞增殖活性第35页
        2.2.9 统计分析第35-36页
3 结果第36-50页
    3.1 RT-PCR检测SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的m RNA表达变化第36-40页
        3.1.1 RNA纯度和完整性检测结果第36页
        3.1.2 Real-Time PCR结果第36-40页
    3.2 Western blot检测SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的蛋白表达变化第40-42页
        3.2.1 BCA蛋白浓度测定第40-41页
        3.2.2 SHEE及SHEEC中NS、Cyclin B1、PTEN蛋白表达水平第41-42页
    3.3 NS基因抑制结果第42-50页
        3.3.1 SHEEC细胞的转染条件第42-43页
        3.3.2 最佳干扰链的筛选第43-44页
        3.3.3 抑制SHEEC细胞NS表达对增殖相关指标Cyclin B1和PTEN m RNA的影响第44-45页
        3.3.4 SHEEC细胞NS低表达对NS、Cyclin B1和PTEN蛋白的影响第45-46页
        3.3.5 细胞凋亡率检测第46-47页
        3.3.6 抑制NS表达对细胞周期的影响第47-48页
        3.3.7 MTT法检测抑制SHEEC中NC表达对细胞增殖的影响第48-50页
4 讨论第50-56页
    4.1 NS、Cyclin B1及PTEN在SHEE、SHEEC及基因沉默SHEEC细胞中的表达第50-52页
        4.1.1 NS在SHEEC细胞中高表达第50-51页
        4.1.2 Cyclin B1在SHEEC细胞中高表达第51页
        4.1.3 PTEN在SHEEC细胞中低表达第51-52页
    4.2 设计合成针对NS的si RNA及其干扰效果第52-53页
    4.3 NS(核干细胞因子)是细胞增殖调节因子第53-54页
    4.4 NS表达下调对细胞凋亡及周期的影响第54-55页
    4.5 NS si RNA干扰的临床应用前景第55-56页
结论第56-57页
参考文献第57-62页
综述第62-74页
    参考文献第70-74页
个人简历第74-75页
致谢第75页

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