| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-36页 |
| 2.1 材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 细胞来源 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要试剂配置 | 第20-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 方法流程图 | 第22-23页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2.2.3 RT-PCR检测永生化食管上皮细胞系SHEE及其恶变细胞系SHEEC中核干细胞因子NS、Cyclin B1、PTEN m RNA的表达 | 第24-28页 |
| 2.2.4 Western blot检测各组中目的基因的蛋白表达情况 | 第28-31页 |
| 2.2.5 细胞转染 | 第31-34页 |
| 2.2.6 PI染色检测细胞周期 | 第34页 |
| 2.2.7 Annexin V-FITC/PI双染法检测NS沉默前后对SHEEC细胞凋亡率的影响 . | 第34-35页 |
| 2.2.8 MTT法检测NS沉默前后细胞增殖活性 | 第35页 |
| 2.2.9 统计分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-50页 |
| 3.1 RT-PCR检测SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的m RNA表达变化 | 第36-40页 |
| 3.1.1 RNA纯度和完整性检测结果 | 第36页 |
| 3.1.2 Real-Time PCR结果 | 第36-40页 |
| 3.2 Western blot检测SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的蛋白表达变化 | 第40-42页 |
| 3.2.1 BCA蛋白浓度测定 | 第40-41页 |
| 3.2.2 SHEE及SHEEC中NS、Cyclin B1、PTEN蛋白表达水平 | 第41-42页 |
| 3.3 NS基因抑制结果 | 第42-50页 |
| 3.3.1 SHEEC细胞的转染条件 | 第42-43页 |
| 3.3.2 最佳干扰链的筛选 | 第43-44页 |
| 3.3.3 抑制SHEEC细胞NS表达对增殖相关指标Cyclin B1和PTEN m RNA的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.4 SHEEC细胞NS低表达对NS、Cyclin B1和PTEN蛋白的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.5 细胞凋亡率检测 | 第46-47页 |
| 3.3.6 抑制NS表达对细胞周期的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.7 MTT法检测抑制SHEEC中NC表达对细胞增殖的影响 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-56页 |
| 4.1 NS、Cyclin B1及PTEN在SHEE、SHEEC及基因沉默SHEEC细胞中的表达 | 第50-52页 |
| 4.1.1 NS在SHEEC细胞中高表达 | 第50-51页 |
| 4.1.2 Cyclin B1在SHEEC细胞中高表达 | 第51页 |
| 4.1.3 PTEN在SHEEC细胞中低表达 | 第51-52页 |
| 4.2 设计合成针对NS的si RNA及其干扰效果 | 第52-53页 |
| 4.3 NS（核干细胞因子）是细胞增殖调节因子 | 第53-54页 |
| 4.4 NS表达下调对细胞凋亡及周期的影响 | 第54-55页 |
| 4.5 NS si RNA干扰的临床应用前景 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 综述 | 第62-74页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 个人简历 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
