| 中文摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词 | 第10-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 文献综述 | 第15-21页 |
| 1.1.1 灰葡萄孢菌与灰霉病 | 第15页 |
| 1.1.2 灰葡萄孢菌的侵染循环 | 第15-16页 |
| 1.1.3 灰葡萄孢菌致病相关基因及致病机理研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究技术路线 | 第22-23页 |
| 第2章 灰葡萄孢菌T-DNA插入转化子群体的建立及致病相关基因的鉴定 | 第23-56页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.2.1 菌株 | 第23页 |
| 2.2.2 载体 | 第23-24页 |
| 2.2.3 仪器与试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.5 培养基 | 第25-27页 |
| 2.2.6 灰葡萄孢菌基因组DNA的小量提取 | 第27页 |
| 2.2.7 灰葡萄孢菌基因组DNA的大量提取 | 第27-28页 |
| 2.2.8 灰葡萄孢菌TotalRNA提取 | 第28页 |
| 2.2.9 质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2.10 质粒酶切 | 第29页 |
| 2.2.11 连接反应 | 第29-30页 |
| 2.2.12 大肠杆菌DH5α感受态细胞转化 | 第30页 |
| 2.2.13 农杆菌感受态的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.14 农杆菌AGL-1的电击转化 | 第31页 |
| 2.2.15 农杆菌AGL-1介导的灰葡萄孢菌遗传转化及转化子筛选 | 第31页 |
| 2.2.16 PCR反应体系与扩增条件 | 第31-33页 |
| 2.2.17 T-DNA侧翼序列的克隆 | 第33-35页 |
| 2.2.18 序列测定及分析 | 第35页 |
| 2.2.19 载体构建 | 第35-36页 |
| 2.2.20 Southernblot分析 | 第36-39页 |
| 2.2.21 实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR) | 第39-40页 |
| 2.2.22 致病力检测 | 第40页 |
| 2.2.23 统计分析 | 第40-41页 |
| 2.3 结果与分析 | 第41-54页 |
| 2.3.1 T-DNA随机插入转化子群体的建立及T-DNA整合部位分析.. | 第41-45页 |
| 2.3.2 T-DNA插入位点的验证 | 第45页 |
| 2.3.3 基因敲除与遗传互补 | 第45-51页 |
| 2.3.4 候选基因与T-DNA插入转化子致病表型的相关性分析 | 第51-54页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第3章 pre-rRNA加工因子BcNop53参与调控灰葡萄孢菌生长发育及致病性研究 | 第56-99页 |
| 3.1 引言 | 第56-57页 |
| 3.2 材料与方法 | 第57-66页 |
| 3.2.1 菌株 | 第57页 |
| 3.2.2 载体 | 第57页 |
| 3.2.3 仪器与试剂 | 第57页 |
| 3.2.4 引物设计与合成 | 第57-59页 |
| 3.2.5 培养基与试剂的配制 | 第59-61页 |
| 3.2.6 序列分析 | 第61页 |
| 3.2.7 生长速率、产孢及菌核形成分析 | 第61页 |
| 3.2.8 孢子萌发分析 | 第61页 |
| 3.2.9 侵染结构观察 | 第61页 |
| 3.2.10 致病性测定 | 第61-62页 |
| 3.2.11 总蛋白提取及含量测定 | 第62-63页 |
| 3.2.12 酶活性的测定 | 第63页 |
| 3.2.13 酵母相关实验 | 第63-65页 |
| 3.2.14 GFP融合表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 3.2.15 ROS检测 | 第66页 |
| 3.2.16 数据统计分析 | 第66页 |
| 3.3 结果与分析 | 第66-95页 |
| 3.3.1 不同物种中Nop53的系统发育进化分析 | 第66-68页 |
| 3.3.2 BcNOP53对酿酒酵母突变体?Scnop53的互补 | 第68-69页 |
| 3.3.3 BcNop53定位于细胞核内 | 第69-71页 |
| 3.3.4 BcNop53缺失影响蛋白质合成及胞外酶的活性 | 第71-74页 |
| 3.3.5 BcNOP53基因缺失影响灰葡萄孢菌丝营养生长 | 第74页 |
| 3.3.6 BcNop53调控灰葡萄孢菌产孢、孢子形态建成与萌发 | 第74-77页 |
| 3.3.7 BcNop53在菌核形成与发育中的作用 | 第77-79页 |
| 3.3.8 BcNop53在灰葡萄孢菌逆境响应中的作用 | 第79-81页 |
| 3.3.9 BcNop53是灰葡萄孢菌致病的关键因子 | 第81-87页 |
| 3.3.10 BcNop53影响侵染结构形成 | 第87-91页 |
| 3.3.11 BcNop53调控灰葡萄孢菌营养生长及致病发育中ROS的产生 | 第91-94页 |
| 3.3.12 BcNop53对ROS形成相关基因的转录调控 | 第94-95页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第95-99页 |
| 第4章 灰葡萄孢菌BcSNF2基因的生物学功能研究 | 第99-120页 |
| 4.1 引言 | 第99页 |
| 4.2 材料与方法 | 第99-105页 |
| 4.2.1 菌株 | 第99页 |
| 4.2.2 引物设计与合成 | 第99-101页 |
| 4.2.3 生长速率测定 | 第101页 |
| 4.2.4 产孢分析 | 第101-102页 |
| 4.2.5 菌核形成分析 | 第102页 |
| 4.2.6 致病性测定 | 第102页 |
| 4.2.7 转录组测序分析 | 第102-105页 |
| 4.3 结果与分析 | 第105-119页 |
| 4.3.1 BcSnf2的系统发育进化分析 | 第105-106页 |
| 4.3.2 BcSNF2基因缺失突变体的生长速率分析 | 第106-107页 |
| 4.3.3 BcSNF2基因对菌落形态及菌核形成的影响 | 第107-109页 |
| 4.3.4 BcSnf2调控灰葡萄孢菌分生孢子形成及萌发 | 第109页 |
| 4.3.5 BcSNF2基因缺失对灰葡萄孢菌致病力的影响 | 第109-111页 |
| 4.3.6 BcSNF2基因缺失突变体ΔBcsnf2与野生型B05.10的转录组分析 | 第111-119页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第119-120页 |
| 结论 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-131页 |
| 作者简介及在学期间主要研究成果 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
