| 提要 | 第1-11页 |
| 第一章 序论 | 第11-35页 |
| ·超氧化物歧化酶(SUPEROXIDE DISMUTASE,SOD,EC1.15.1.1) | 第12-15页 |
| ·过氧化氢酶(CATALASE,CAT,EC 1.11.1.6) | 第15-16页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶(GLUTATHIONE PEROXIDASE,GPX,EC1.11.1.9) | 第16-21页 |
| ·乒乓机制 | 第19-20页 |
| ·顺序机制 | 第20-21页 |
| ·谷肽甘肽还原酶(GLUTATHIONE REDUCTASE,GR,EC 1.6.4.2) | 第21-22页 |
| ·抗氧化模拟酶 | 第22-23页 |
| ·具有抗氧化协同作用的多功能模拟酶 | 第23-35页 |
| ·兼具多功能酶活性的小分子化合物模型 | 第23-31页 |
| ·兼具多功能酶活性的生物大分子蛋白模型 | 第31-35页 |
| 第二章 35肽的设计及构建 | 第35-47页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·质粒和菌株 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-43页 |
| ·35肽氨基酸序列的设计 | 第36-38页 |
| ·重叠PCR扩增目的基因 | 第38页 |
| ·凝胶回收PCR产物 | 第38-40页 |
| ·质粒提取 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·测序 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-46页 |
| ·35肽氨基酸序列的设计 | 第43-44页 |
| ·35肽的构建 | 第44-45页 |
| ·GST融合表达系统 | 第45-46页 |
| 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 双活性35肽的表达纯化 | 第47-55页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·质粒和菌株 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·融合蛋白在E.coli BL-21(DE3)的表达 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白的Cys缺陷型表达[79,80] | 第48-49页 |
| ·sjGST,sjGST-35P,sjGST-Se-35P的纯化 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白表达的同时引入Cu2+[81] | 第50页 |
| ·凝血酶裂解融合蛋白[82] | 第50页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE[83] | 第50-51页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-54页 |
| ·硒代半胱氨酸的原核表达 | 第52页 |
| ·铜离子的引入 | 第52-54页 |
| 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 双活性35肽酶学性质的研究 | 第55-63页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·GPx活力的测定[85] | 第55页 |
| ·SOD活力的测定[86] | 第55-56页 |
| ·GSH结合常数测定[87] | 第56-57页 |
| ·硒含量的测定 | 第57页 |
| ·Cu2+含量的测定[89] | 第57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-63页 |
| ·SOD和GPx活性 | 第57-59页 |
| ·凝血酶裂解对Se-Cu-35P活性的影响 | 第59-60页 |
| ·Se-Cu-35P的GPx动力学分析 | 第60-62页 |
| ·Se-Cu-35P催化机理的假设 | 第62-63页 |
| 第五章 抗氧化协同效应的研究 | 第63-71页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-65页 |
| ·Se-Cu-35P抗H2O2失活能力的测定[90] | 第63页 |
| ·Se-Cu-35P对心肌线粒体的抗氧化损伤作用 | 第63-65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-70页 |
| ·Se-Cu-35P抗H2O2失活能力的测定 | 第65-66页 |
| ·Se-Cu-35P对损伤线粒体膨胀度的影响 | 第66-67页 |
| ·Se-CuZn-65P对损伤线粒体脂质过氧化的抑制 | 第67-70页 |
| 本章小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 摘要 | 第83-85页 |
| ABSTRACT | 第85-87页 |
