| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| 1.1 基因治疗 | 第13页 |
| 1.2 非病毒型基因载体 | 第13-15页 |
| 1.2.1 阳离子脂质体 | 第13-14页 |
| 1.2.2 阳离子聚合物 | 第14-15页 |
| 1.3 基因介导过程 | 第15-16页 |
| 1.4 基于聚乙烯亚胺(PEI)的载体 | 第16-27页 |
| 1.4.1 对大分子量 PEI 的改性和修饰 | 第17-20页 |
| 1.4.2 对低分子量 PEI 修饰和改性 | 第20-22页 |
| 1.4.3 对低分子量 PEI 进行交联 | 第22-24页 |
| 1.4.4 将低分子量 PEI 接枝到其他高分子链或聚集体 | 第24-27页 |
| 1.4.4.1 天然高分子上接枝低分子量 PEI | 第24-25页 |
| 1.4.4.2 可生物降解聚合物链上接枝低分子量 PEI | 第25页 |
| 1.4.4.3 聚碳酸酯主链上接枝低分子量 PEI | 第25-26页 |
| 1.4.4.4 低分子量 PEI 修饰的纳米粒子 | 第26-27页 |
| 1.5 改善材料生物相容性的研究与应用 | 第27-30页 |
| 1.6. 酸响应型化学键在生物材料中的应用 | 第30-32页 |
| 1.7 本课题的提出及主要研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 以甜菜碱和腙交联剂改性低分子量聚乙烯亚胺作为基因载体 | 第34-70页 |
| 2.1 引言 | 第34-36页 |
| 2.2 实验部分 | 第36-43页 |
| 2.2.1 原料与试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.2 腙交联剂的合成 | 第37-38页 |
| 2.2.2.1 丁二酸叔丁氧羰基肼的合成 | 第37页 |
| 2.2.2.2 丁二酸肼盐酸盐的合成 | 第37页 |
| 2.2.2.3 含腙键的交联剂(Hdz)的合成 | 第37-38页 |
| 2.2.3 N,N-二甲基(丙烯酰胺丙基)丙烷磺酸铵(DMAAPS)的合成 | 第38页 |
| 2.2.4 腙交联 PEI 的合成(PEI-Hdz) | 第38页 |
| 2.2.5 甜菜碱修饰的腙交联 PEI(PEI-Hdz-DMAAPS) | 第38-39页 |
| 2.2.6 粘均分子量测定 | 第39-40页 |
| 2.2.7 测试与仪器 | 第40页 |
| 2.2.8 基因载体的蛋白质吸附实验 | 第40-41页 |
| 2.2.9 基因载体的溶血性测试 | 第41页 |
| 2.2.10 细胞毒性测试 | 第41页 |
| 2.2.11 缓冲能力测试 | 第41-42页 |
| 2.2.12 聚合物与 DNA 复合物的制备 | 第42页 |
| 2.2.13 凝胶电泳实验 | 第42页 |
| 2.2.14 载体对 DNA 的保护 | 第42页 |
| 2.2.15 复合物粒径、zeta 电位分析 | 第42-43页 |
| 2.2.16 体外转染实验 | 第43页 |
| 2.2.17 统计学分析 | 第43页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第43-69页 |
| 2.3.1 腙交联剂的合成与表征 | 第43-46页 |
| 2.3.1.1 丁二酸叔丁氧羰基肼的合成与表征 | 第43-44页 |
| 2.3.1.2 丁二酸肼盐酸盐的合成与表征 | 第44-45页 |
| 2.3.1.3 Hdz 的合成与表征 | 第45-46页 |
| 2.3.2 N,N-二甲基(丙烯酰胺丙基)丙烷磺酸铵(DMAAPS)的合成与表征 | 第46-48页 |
| 2.3.3 Hdz 交联 PEI 的合成与表征 | 第48页 |
| 2.3.4 甜菜碱修饰的腙交联 PEI(PEI-Hdz-DMAAPS)的合成与表征 | 第48-52页 |
| 2.3.5 交联 PEI 分子量测定 | 第52-53页 |
| 2.3.6 载体缓冲能力 | 第53-54页 |
| 2.3.7 载体的生物相容性考察 | 第54-56页 |
| 2.3.7.1 载体的蛋白质吸附性能 | 第54-55页 |
| 2.3.7.2 载体的溶血行为 | 第55-56页 |
| 2.3.8 PEI-Hdz-DMAAPS/DNA 复合物的性质考察 | 第56-59页 |
| 2.3.8.1 复合物凝胶电泳测试 | 第56-58页 |
| 2.3.8.2 复合物的粒径和 zeta 电位 | 第58-59页 |
| 2.3.9 载体对 DNA 的保护 | 第59-60页 |
| 2.3.10 载体的细胞毒性评价 | 第60-63页 |
| 2.3.11 载体介导的体外基因转染 | 第63-69页 |
| 2.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第三章 以甜菜碱改性、核苷碱基对交联的低分子量 PEI 作为基因载体的研究 | 第70-102页 |
| 3.1 引言 | 第70-71页 |
| 3.2 实验部分 | 第71-77页 |
| 3.2.1 原料与试剂 | 第71-72页 |
| 3.2.2 磺酸基甜菜碱 DMAAPS 的合成 | 第72页 |
| 3.2.3 羧基腺嘌呤(ACOOH)的合成 | 第72-73页 |
| 3.2.4 交联剂 U-(CH_2)_6-U (U-U)的合成 | 第73页 |
| 3.2.4.1 TsO-(CH_2)_6-OTs 的合成 | 第73页 |
| 3.2.4.2 U-(CH_2)_6-U 的合成 | 第73页 |
| 3.2.5 PEI-A 的合成 | 第73-74页 |
| 3.2.6 甜菜碱进一步改性 PEI-A | 第74-75页 |
| 3.2.7 A-U 交联 PEI 的制备 | 第75页 |
| 3.2.8 粘均分子量的测定 | 第75-76页 |
| 3.2.9 测试与仪器 | 第76页 |
| 3.2.10 蛋白吸附实验 | 第76页 |
| 3.2.11 载体溶血测试 | 第76页 |
| 3.2.12 细胞毒性测试 | 第76-77页 |
| 3.2.13 缓冲能力测试 | 第77页 |
| 3.2.14 聚合物与 DNA 复合物的制备 | 第77页 |
| 3.2.15 凝胶电泳实验 | 第77页 |
| 3.2.16 载体对 DNA 的保护能力评价 | 第77页 |
| 3.2.17 复合物粒径、zeta 电位分析 | 第77页 |
| 3.2.18 体外转染实验 | 第77页 |
| 3.2.19 统计学分析 | 第77页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第77-101页 |
| 3.3.1 ACOOH 的合成与表征 | 第77-78页 |
| 3.3.2 U-U 的合成与表征 | 第78-80页 |
| 3.3.2.1 中间产物 TsO-(CH_2)_6-OTs 的合成 | 第78-79页 |
| 3.3.2.2 交联剂 U-U 的合成与表征 | 第79-80页 |
| 3.3.3 PEI-A 和 PEI-A-B 的合成与表征 | 第80-83页 |
| 3.3.4 交联产物(PEI-A-U-U)的表征 | 第83-88页 |
| 3.3.4.1 ~1H NMR 分析 | 第84-86页 |
| 3.3.4.2 A-U 交联 PEI 的分子量测定 | 第86-87页 |
| 3.3.4.3 A-U 交联 PEI 的变温红外研究 | 第87-88页 |
| 3.3.5 样品的质子缓冲能力 | 第88-89页 |
| 3.3.6 载体的生物相容性评价 | 第89-91页 |
| 3.3.6.1 载体的蛋白吸附性能 | 第89页 |
| 3.3.6.2 载体的溶血性能 | 第89-91页 |
| 3.3.7 改性 PEI 与 DNA 的复合能力考察 | 第91-93页 |
| 3.3.7.1 凝胶电泳实验 | 第91-92页 |
| 3.3.7.2 复合物的粒径及 zeta 电位 | 第92-93页 |
| 3.3.8 载体对 DNA 的保护作用 | 第93-94页 |
| 3.3.9 载体的细胞毒性评价 | 第94-96页 |
| 3.3.10 载体介导的体外基因转染 | 第96-101页 |
| 3.4 本章小结 | 第101-102页 |
| 第四章 葡聚糖接枝甜菜碱改性 PEI 作为生物相容性基因载体 | 第102-122页 |
| 4.1 引言 | 第102-103页 |
| 4.2 实验部分 | 第103-106页 |
| 4.2.1 原料与试剂 | 第103页 |
| 4.2.2 甜菜碱的合成 | 第103页 |
| 4.2.3 Dex-OTS 的合成 | 第103-104页 |
| 4.2.4 Dex-PEI 的合成 | 第104页 |
| 4.2.5 Dex-PEI-Betaine 的合成 | 第104-105页 |
| 4.2.6 测试与表征 | 第105页 |
| 4.2.7 蛋白吸附实验 | 第105页 |
| 4.2.8 载体溶血测试 | 第105页 |
| 4.2.9 细胞毒性测试 | 第105页 |
| 4.2.10 缓冲能力测试 | 第105页 |
| 4.2.11 聚合物与 DNA 复合物的制备 | 第105-106页 |
| 4.2.12 凝胶电泳实验 | 第106页 |
| 4.2.13 复合物粒径、zeta 电位分析 | 第106页 |
| 4.2.14 体外转染实验 | 第106页 |
| 4.2.15 统计学分析 | 第106页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第106-119页 |
| 4.3.1 Dex-OTS 的合成与表征 | 第106-107页 |
| 4.3.2 Dex-PEI 的合成与表征 | 第107-108页 |
| 4.3.3 Dex-PEI-Betaine 的合成与表征 | 第108-110页 |
| 4.3.4 样品的缓冲能力 | 第110页 |
| 4.3.5 载体的生物相容性考察 | 第110-112页 |
| 4.3.5.1 载体的蛋白吸附实验 | 第110-111页 |
| 4.3.5.2 载体的溶血实验 | 第111-112页 |
| 4.3.6 Dex-PEI 系列样品与 DNA 的复合物的形成与表征 | 第112-114页 |
| 4.3.6.1 复合物凝胶电泳测试 | 第112-113页 |
| 4.3.6.2 复合物的粒径与 zeta 电位 | 第113-114页 |
| 4.3.7 载体的细胞毒性 | 第114-116页 |
| 4.3.8 载体介导的体外基因转染实验 | 第116-119页 |
| 4.4 三个基因载体体系比较 | 第119-121页 |
| 4.5 本章小结 | 第121-122页 |
| 结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-137页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 附件 | 第140页 |
