| 摘要 | 第4-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 英文缩略词表 | 第17-19页 |
| 目录 | 第19-22页 |
| 第一章 Klotho基因及蛋白在胃癌细胞株中的表达 | 第22-33页 |
| 前言 | 第22页 |
| 1. 实验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 实验耗材 | 第22-23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 1.3 主要设备仪器 | 第23-24页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.1 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.2 细胞培养及细胞冻存 | 第24-25页 |
| 2.3 细胞RNA提取和质量鉴定 | 第25-26页 |
| 2.4 免疫印记检测Klotho蛋白的表达 | 第26-29页 |
| 2.5 甲基化特异性PCR检测Klotho基因 | 第29-30页 |
| 2.6 结果分析 | 第30-31页 |
| 3. 讨论 | 第31-32页 |
| 4. 结论 | 第32-33页 |
| 第二章 5-AZa诱导胃癌细胞株GC-7901Klotho基因的表达及生物学意义 | 第33-47页 |
| 前言 | 第33-34页 |
| 1. 实验材料及试剂 | 第34-35页 |
| 1.1 实验耗材 | 第34-35页 |
| 1.2 主要设备仪器 | 第35页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第35页 |
| 2. 细胞培养实验方法 | 第35-36页 |
| 2.1 细胞传代培养 | 第35页 |
| 2.2 细胞计数 | 第35-36页 |
| 3. 免疫印记操作规程 | 第36-39页 |
| 3.1 Western blot主要试剂的配制 | 第36-37页 |
| 3.2 Western blot检测Klotho蛋白的表达 | 第37-39页 |
| 4. 三组实验过程 | 第39-42页 |
| 4.1 [实验一] 流式细胞仪检测三组细胞凋亡 | 第39-40页 |
| 4.2 [实验二] Western blot检测Klotho可能作用的靶点 | 第40-41页 |
| 4.3 [实验三] 检测Klotho对胃癌细胞自噬的作用 | 第41-42页 |
| 5. 实验结果 | 第42-43页 |
| 6. 讨论 | 第43-45页 |
| 7. 结论 | 第45-47页 |
| 第三章 Klotho真核表达载体的构建并转染胃癌细胞 | 第47-63页 |
| 前言 | 第47页 |
| 1. 实验材料和方法 | 第47-52页 |
| 1.1 主要试剂 | 第47-48页 |
| 1.2 主要设备 | 第48页 |
| 1.3 常用试剂的配制 | 第48-49页 |
| 1.4 实验材料 | 第49-52页 |
| 2. 人胃粘膜细胞总RNA提取 | 第52-56页 |
| 3. 将pZsGreen1-C1-Klotho载体转染GC-7901细胞株 | 第56-61页 |
| 3.1 需要材料 | 第56-59页 |
| 3.2 转染胃癌细胞 | 第59-61页 |
| 3.3 结果分析 | 第61页 |
| 3.4 实验结果 | 第61页 |
| 4. 讨论 | 第61-62页 |
| 5. 结论 | 第62-63页 |
| 第四章 Klotho基因对胃癌细胞凋亡、自噬及相关信号通路的作用 | 第63-84页 |
| 前言 | 第63页 |
| [实验一] Klotho对胰岛素信号通路轴的影响 | 第63-69页 |
| 1. 实验材料及试剂 | 第63-65页 |
| 1.1 主要试剂及材料 | 第63-64页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第64-65页 |
| 1.3 细胞复苏 | 第65页 |
| 1.4 细胞传代培养 | 第65页 |
| 1.5 细胞计数 | 第65页 |
| 2. 免疫印记检测胰岛素相关信号通路轴蛋白的表达 | 第65-67页 |
| 3. 讨论 | 第67-69页 |
| 4. 结论 | 第69页 |
| [实验二] Klotho对胃癌细胞株GC-7901凋亡、周期及增值的影响 | 第69-75页 |
| 1. 实验材料 | 第69-71页 |
| 1.1 主要试剂 | 第69-70页 |
| 1.2 主要的设备仪器 | 第70页 |
| 1.3 细胞传代 | 第70页 |
| 1.4 细胞计数 | 第70-71页 |
| 2. 实验分组(blank-V、Klotho-V、k-V+3-MA、k-V+ZVP) | 第71-73页 |
| 2.1 流式细胞仪检测细胞凋亡及周期实验 | 第71-72页 |
| 2.2 细胞增殖实验 | 第72页 |
| 2.3 结果分析 | 第72-73页 |
| 2.4 实验结果 | 第73页 |
| 3. 讨论 | 第73-75页 |
| 4. 结论 | 第75页 |
| [实验三] Klotho对胃癌细胞株GC-7901自噬表达的影响 | 第75-84页 |
| 1. 实验材料 | 第75-78页 |
| 1.1 细胞培养 | 第75-76页 |
| 1.2 主要试剂 | 第76页 |
| 1.3 主要的设备仪器 | 第76-77页 |
| 1.4 Western blot主要试剂的配制 | 第77-78页 |
| 2. 免疫印记和共聚焦实验 | 第78-81页 |
| 2.1 免疫印记检测自噬的表达 | 第78-79页 |
| 2.2 共聚焦实验检测自噬的表达 | 第79-81页 |
| 2.3 结果分析 | 第81页 |
| 2.4 实验结果 | 第81页 |
| 3. 讨论 | 第81-83页 |
| 4. 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| Review | 第92-105页 |
| Reference | 第98-105页 |
| 综述 | 第105-113页 |
| 参考文献 | 第109-113页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
