| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 ：文献综述 | 第8-21页 |
| 1.1 代谢工程改造大肠杆菌合成琥珀酸 | 第8-14页 |
| 1.1.1 竞争性副产物合成途径的敲除 | 第9-10页 |
| 1.1.2 提高琥珀酸前体物 PEP 的供给 | 第10-11页 |
| 1.1.3 关键酶的过表达 | 第11-13页 |
| 1.1.4 还原力 NADH 的供给 | 第13-14页 |
| 1.1.5 代谢工程结合代谢进化改造大肠杆菌 | 第14页 |
| 1.2 大肠杆菌的氧化还原辅因子代谢工程 | 第14-19页 |
| 1.2.1 NAD(P)H 合成途径的代谢工程修饰 | 第14-16页 |
| 1.2.2 氧化还原辅因子的相互转化 | 第16-17页 |
| 1.2.3 异源氧化还原辅因子依赖型酶的过表达 | 第17-18页 |
| 1.2.4 吡啶生物合成途径与 NAD 的转运 | 第18-19页 |
| 1.3 大肠杆菌代谢工程合成琥珀酸存在的问题 | 第19页 |
| 1.4 本课题研究思路和研究内容 | 第19-21页 |
| 1.4.1 研究思路 | 第19-20页 |
| 1.4.2 研究内容和技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验相关仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验药品和试剂、培养基配制 | 第23-27页 |
| 2.2.1 实验药品 | 第23-25页 |
| 2.2.2 溶剂和培养基配制 | 第25-27页 |
| 2.3 试验方法 | 第27-37页 |
| 2.3.1 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.2 DNA 片段的回收和纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第29页 |
| 2.3.4 DNA 的酶切、去磷酸化和连接 | 第29-30页 |
| 2.3.5 大肠杆菌化学转化感受态细胞的制备（CaCl_2 法） | 第30-31页 |
| 2.3.6 大肠杆菌化学转化感受态细胞的转化 | 第31页 |
| 2.3.7 电转化感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.8 电转化感受态细胞的转化 | 第32页 |
| 2.3.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.10 大肠杆菌基因组的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.11 大肠杆菌基因的敲除 | 第33-34页 |
| 2.3.12 摇瓶双相发酵 | 第34-35页 |
| 2.3.13 发酵产物的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.14 葡萄糖的测定 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第37-70页 |
| 3.1 产琥珀酸大肠杆菌的代谢工程改造 | 第37-60页 |
| 3.1.1 外源谷氨酸棒杆菌的突变酶基因 zwf243-gnd361 的诱导表达 | 第37-41页 |
| 3.1.2 产琥珀酸放线杆菌 pck 基因的异源表达与 ppc 基因的敲除 | 第41-45页 |
| 3.1.3 产琥珀酸放线杆菌 pck 基因替换大肠杆菌 pck 基因 | 第45-49页 |
| 3.1.4 过表达 pgl 基因 | 第49-51页 |
| 3.1.5 过表达 tktA | 第51-52页 |
| 3.1.6 过表达 talB | 第52-54页 |
| 3.1.7 过表达 pck | 第54-55页 |
| 3.1.8 过表达 sthA（udhA） | 第55-56页 |
| 3.1.9 敲除 ack-pta | 第56-60页 |
| 3.2 琥珀酸最大理论得率的计算 | 第60-61页 |
| 3.3 工程菌株发酵结果与分析 | 第61-70页 |
| 3.3.1 PP 途径的扰动对琥珀酸合成的影响 | 第61-64页 |
| 3.3.2 PCK 替换 PPC 成为主要的催化羧化反应酶 | 第64-66页 |
| 3.3.3 转氢酶基因 sthA 过表达对琥珀酸合成的影响 | 第66-67页 |
| 3.3.4 乙酸合成途径的敲除对琥珀酸合成的影响 | 第67页 |
| 3.3.5 不同种子培养基对琥珀酸合成的影响 | 第67-70页 |
| 第四章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 4.1 实验结论 | 第70-71页 |
| 4.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
