| 中文摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 主要英文缩写词 | 第10-12页 |
| 绪论 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 HDACs在乳腺癌治疗中的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 HDACs概述 | 第13页 |
| 1.1.2 HDACs在癌细胞中差异表达及可能机制 | 第13-16页 |
| 1.1.2.1 HDACs在癌细胞中的差异表达 | 第13-14页 |
| 1.1.2.2 HDAC3在癌症中的表达 | 第14-15页 |
| 1.1.2.3 HDAC6在癌症中的表达 | 第15页 |
| 1.1.2.4 HDACs在癌细胞中的作用及可能的作用机制 | 第15页 |
| 1.1.2.5 HDACs在乳腺癌细胞中差异表达的可能机制 | 第15-16页 |
| 1.1.3 HDACs抑制剂的临床应用 | 第16-17页 |
| 1.1.3.1 FDA已批准使用的HDIs | 第16页 |
| 1.1.3.2 HDACs抑制剂在乳腺癌治疗中的临床应用及现状分析 | 第16-17页 |
| 1.2. TAM在乳腺癌治疗中的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.2.1 TAM概述 | 第17-19页 |
| 1.2.1.1 TAM的发展历程 | 第17-18页 |
| 1.2.1.2 TAM在乳腺癌中的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.2.2 乳腺癌TAM耐药的可能原因 | 第19-21页 |
| 1.2.2.1 理学机制 | 第19页 |
| 1.2.2.2 ERα表达的丢失或者修饰 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 信号通路的交互作用 | 第20-21页 |
| 1.2.3 乳腺癌TAM耐药的解决方案 | 第21页 |
| 1.3. 结论与展望 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-36页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 乳腺癌细胞系 | 第23页 |
| 2.1.2 小干扰RNA | 第23页 |
| 2.1.3 HDAC3表达载体 | 第23-24页 |
| 2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.1 细胞培养及转染 | 第24页 |
| 2.2.2 RNA提取、RT-PCR及RT-qPCR | 第24页 |
| 2.2.3 Western-blot相关试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.4 HDACs活力测定相关试剂 | 第25页 |
| 2.2.5 重组质粒构建及转染 | 第25页 |
| 2.2.6 主要使用药物 | 第25页 |
| 2.2.7 细胞活性检测相关试剂 | 第25页 |
| 2.3 主要耗材及仪器 | 第25-26页 |
| 2.3.1 主要耗材 | 第25页 |
| 2.3.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.4 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第26页 |
| 2.4.2 Western-bolt检测基因蛋白水平表达情况 | 第26-28页 |
| 2.4.2.1 癌细胞内总蛋白的提取和制备 | 第26-27页 |
| 2.4.2.2 蛋白定量 | 第27页 |
| 2.4.2.3 SDS-PAGE凝胶电泳及蛋白免疫印迹 | 第27-28页 |
| 2.4.3 瞬时转染siRNA | 第28-29页 |
| 2.4.4 总RNA提取 | 第29页 |
| 2.4.5 qPCR检测蛋白编码基因表达 | 第29-32页 |
| 2.4.5.1 RT-PCR | 第29页 |
| 2.4.5.2 实时定量PCR (RT-qPCR) | 第29-32页 |
| 2.4.6 药物处理 | 第32页 |
| 2.4.6.1 药物配置 | 第32页 |
| 2.4.6.2 药物使用 | 第32页 |
| 2.4.7 HDACs活力测定 | 第32-33页 |
| 2.4.7.1 蛋白样品制备 | 第32页 |
| 2.4.7.2 蛋白浓度测定 | 第32页 |
| 2.4.7.3 HDACs活力测定 | 第32-33页 |
| 2.4.8 pEGFP-N2-hHDAC3质粒构建及转染 | 第33-35页 |
| 2.4.8.1 相关培养基 | 第33页 |
| 2.4.8.2 DH5α感受态细胞的制作 | 第33页 |
| 2.4.8.3 重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.8.4 转染pEGFP-N2-hHDAC3质粒 | 第34-35页 |
| 2.4.9 CCK8(Cell Counting Kit-8)检测细胞增殖能力 | 第35页 |
| 2.4.10 划痕实验 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第36-49页 |
| 3.1 前言 | 第36页 |
| 3.2 乳腺癌细胞中ERα对HDACs家族的影响 | 第36-41页 |
| 3.2.1 ERα影响HDACs家族活性 | 第36-37页 |
| 3.2.2 ERα调控HDACs家族成员转录 | 第37-38页 |
| 3.2.3 抑制ERα导致HDAC1,2,3,5,6转录水平升高 | 第38页 |
| 3.2.4 抑制ERα导致HDAC3和HDAC6翻译水平升高 | 第38-39页 |
| 3.2.5 T47D TAM耐药细胞系中ERα, HDAC3和HDAC6表达情况 | 第39-40页 |
| 3.2.6 HDAC3, HDAC6在乳腺癌中的差异表达 | 第40页 |
| 3.2.7. 小结 | 第40-41页 |
| 3.3 HDAC3对H3K9Ac的调控作用 | 第41-45页 |
| 3.3.1 ERα负调控HDAC3 | 第41页 |
| 3.3.2 ERα在T47D细胞系中影响组蛋白乙酰化位点的乙酰化水平 | 第41-42页 |
| 3.3.3 ERα在MCF7细胞系中影响组蛋白乙酰化位点的乙酰化水平 | 第42页 |
| 3.3.4 T47D TAM耐药细胞系中H3K9Ac乙酰化水平变化 | 第42页 |
| 3.3.5 HDAC3参与去乙酰化H3K9Ac | 第42-43页 |
| 3.3.6 HDAC3参与调控细胞周期和细胞增殖 | 第43-44页 |
| 3.3.7 小结 | 第44-45页 |
| 3.4 YAP参与HDAC6调控网络促进乳腺癌发展 | 第45-46页 |
| 3.4.1 Hippo-YAP信号通路参与ERα-HDAC6调控网络 | 第45-46页 |
| 3.4.2 HDAC6影响乳腺癌细胞增殖和迁移 | 第46页 |
| 3.4.3 小结 | 第46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 结论与展望 | 第49-50页 |
| 4.1 结论 | 第49页 |
| 4.2 存在问题与展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
