摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5页 |
1.前言 | 第8-10页 |
2.实验材料与方法 | 第10-34页 |
2.1 实验质粒与细胞 | 第10-16页 |
2.1.1 细胞培养 | 第10页 |
2.1.2 分子生物实验相关试剂 | 第10-13页 |
2.1.3 细胞生物相关实验材料及试剂配制 | 第13-14页 |
2.1.4 WesternBlot蛋白分析相关材料及试剂配制 | 第14-16页 |
2.1.5 质粒转染材料及试剂配制 | 第16页 |
2.2 实验仪器与设备 | 第16-17页 |
2.3 实验方法 | 第17-34页 |
2.3.1 感受态细胞制备 | 第17-18页 |
2.3.2 酶切连接反应 | 第18-19页 |
2.3.3 质粒转化 | 第19页 |
2.3.4 质粒抽提 | 第19-21页 |
2.3.5 细胞培养 | 第21页 |
2.3.6 质粒转染 | 第21-22页 |
2.3.7 基因组PCR扩增 | 第22-24页 |
2.3.8 RNA检测 | 第24-26页 |
2.3.9 WesternBlotting | 第26-27页 |
2.3.10 荧光素酶报告分析(LuciferaseAssay) | 第27-28页 |
2.3.11 染色质免疫沉淀(ChIP) | 第28-29页 |
2.3.12 伤口愈合实验 | 第29页 |
2.3.13 Transwell侵袭实验 | 第29-30页 |
2.3.14 HE染色 | 第30-31页 |
2.3.15 RNA荧光原位杂交(RNA-FISH) | 第31页 |
2.3.16 CRISPR/Cas9技术 | 第31-34页 |
3.实验结果 | 第34-42页 |
3.1 敲降HOTAIR减少MKL1蛋白表达 | 第34页 |
3.2 过表达MKL1促进HeLa细胞的侵袭与迁移 | 第34-35页 |
3.3 敲降HOTAIR和MKL1能协同抑制细胞迁移和侵袭 | 第35-37页 |
3.4 敲除MKL1降低细胞迁移和侵袭能力 | 第37-38页 |
3.5 宫颈癌患者中高水平的HOTAIR与MKL1表达呈正相关 | 第38-40页 |
3.6 MKL1/SRF结合HOTAIR启动子区CArGbox激活其转录 | 第40-42页 |
4.结论 | 第42-43页 |
5.讨论与展望 | 第43-46页 |
致谢 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-54页 |
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54-55页 |
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第55页 |