| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词对照表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 安莎类抗生素生物合成的研究进展 | 第13-25页 |
| 1.1.1 安莎类抗生素生物活性及应用价值 | 第14-15页 |
| 1.1.2 安莎类抗生素生物合成途径概述 | 第15-18页 |
| 1.1.3 安莎类抗生素AHBA合酶功能的研究 | 第18-19页 |
| 1.1.4 安莎类抗生素生物合成基因簇研究 | 第19-25页 |
| 1.2 C_7N氨基环醇类抗生素 | 第25-27页 |
| 1.2.1 氨基环醇类抗生素及其应用价值 | 第25-26页 |
| 1.2.2 氨基环醇类生物合成途径概述 | 第26-27页 |
| 1.3 本文研究策略及目的 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-36页 |
| 2.1.1 用于筛选的菌种库菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 其它菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.3 质粒 | 第29页 |
| 2.1.4 引物 | 第29-31页 |
| 2.1.5 试剂盒及工具酶 | 第31页 |
| 2.1.6 培养基 | 第31-33页 |
| 2.1.7 实验试剂 | 第33-35页 |
| 2.1.8 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-49页 |
| 2.2.1 放线菌菌种的活化及保藏 | 第36页 |
| 2.2.2 放线菌总DNA的少量快速提取 | 第36-37页 |
| 2.2.3 放线菌总DNA的制备(大量提取) | 第37页 |
| 2.2.4 简并引物的设计 | 第37-38页 |
| 2.2.5 PCR扩增反应体系及条件 | 第38-39页 |
| 2.2.6 PCR扩增产物的回收、克隆及序列测定 | 第39-40页 |
| 2.2.7 Inoue法制备大肠杆菌感受态 | 第40页 |
| 2.2.8 16S rRNA系统发育树的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.9 AHBA合酶基因转录水平检测(RT-PCR) | 第41-43页 |
| 2.2.10 培养基对特定基因表达量的影响 | 第43-44页 |
| 2.2.11 Southern杂交 | 第44-47页 |
| 2.2.12 两亲本介导的质粒DNA的跨属接合转移及初步验证 | 第47页 |
| 2.2.13 基因组扫描 | 第47-48页 |
| 2.2.14 生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-77页 |
| 3.1 待测菌株基因组DNA的提取 | 第49页 |
| 3.2 安莎类抗生素生物合成基因资源的挖掘 | 第49-74页 |
| 3.2.1 引物AHBA-F/R2的筛选结果 | 第50-54页 |
| 3.2.2 引物AHBA-A'F/CR的筛选结果 | 第54-61页 |
| 3.2.3 AHBA合酶基因阳性菌株者的16S rRNA系统发育树 | 第61-62页 |
| 3.2.4 AHBA合酶基因转录水平检测 | 第62-65页 |
| 3.2.5 A00968的接合转移条件 | 第65-67页 |
| 3.2.6 A00968的Southern杂交 | 第67-69页 |
| 3.2.7 培养基对A00941中AHBA合酶基因表达量的影响 | 第69-70页 |
| 3.2.8 A00941基因组DNA扫描结果分析 | 第70-74页 |
| 3.3 氨基环醇类抗生素生物合成基因资源的挖掘 | 第74-77页 |
| 3.3.1 氨基环醇类简并引物的设计 | 第74页 |
| 3.3.2 引物CYC-AF/DR的筛选结果 | 第74-75页 |
| 3.3.3 氨基环醇类阳性菌株PCR产物序列测定及比对分析 | 第75-77页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第77-82页 |
| 4.1 设计简并引物从基因水平筛选阳性菌株 | 第77-78页 |
| 4.2 引物AHBA-A'F/CR与引物AHBA-F/R2的对比分析 | 第78-79页 |
| 4.3 RT-PCR检测特定基因的转录水平 | 第79-80页 |
| 4.4 大肠杆菌与马杜拉放线菌间的接合转移 | 第80页 |
| 4.5 AHBA合酶基因阳性菌株基因组序列中目的基因簇分析 | 第80-82页 |
| 第五章 总结与展望 | 第82-83页 |
| 5.1 工作总结 | 第82页 |
| 5.2 工作展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
