| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-31页 |
| 1 昆虫蜕皮激素受体研究概况 | 第17页 |
| 1.1 蜕皮激素 | 第17页 |
| 2 蜕皮激素受体 | 第17-21页 |
| 2.1 蜕皮激素受体的结构及功能 | 第17-19页 |
| 2.2 家蚕 BmEcR 和 BmUSP 基因研究概况 | 第19-20页 |
| 2.3 研究昆虫 EcR 和 USP 的意义 | 第20页 |
| 2.4 研究 EcR 和 USP 的问题与展望 | 第20-21页 |
| 3 基因表达调控 | 第21-24页 |
| 3.1 启动子 | 第21页 |
| 3.2 启动子特征与结构 | 第21-22页 |
| 3.3 顺式作用调控 | 第22-23页 |
| 3.4 反式作用调节 | 第23-24页 |
| 4 启动子研究方法 | 第24-31页 |
| 4.1 双荧光素酶报告基因检测系统 | 第24-25页 |
| 4.2 Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统 | 第25-28页 |
| 4.3 启动子功能分析 | 第28-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-45页 |
| 1 家蚕品种及饲养 | 第31页 |
| 2 菌株、病毒、质粒和细胞系 | 第31页 |
| 3 常用试剂和缓冲液配制 | 第31-36页 |
| 3.1 常用分子生物学试剂 | 第31页 |
| 3.2 LB 培养基(Luria–Bertani Medium) | 第31页 |
| 3.3 抗生素储备液 | 第31-32页 |
| 3.4 IPTG | 第32页 |
| 3.5 X-gal | 第32页 |
| 3.6 蓝白斑筛选平板 | 第32页 |
| 3.7 常用溶液的配制 | 第32-36页 |
| 3.8 双荧光素酶检测试剂盒：Dual-Luciferase Reporter Assay System，购自美国Promega 公司 | 第36页 |
| 3.9 昆虫细胞培养液：TC-100 培养基，购自美国 Invitrogen 公司 | 第36页 |
| 3.10 胎牛血清：Fetal Bovine Serum，购自美国 Invitrogen 公司 | 第36页 |
| 4 实验方法 | 第36-45页 |
| 4.1 家蚕基因组 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| 4.2 常规 PCR 反应 | 第37页 |
| 4.3 琼脂糖凝胶回收 DNA 片段 | 第37页 |
| 4.4 DNA 片段的连接反应 | 第37页 |
| 4.5 酶切反应 | 第37页 |
| 4.6 连接产物的转化 | 第37-38页 |
| 4.7 测序和 DNA 合成 | 第38页 |
| 4.8 DNA 片段的退火 | 第38页 |
| 4.9 质粒 DNA 少量快速提取—碱法 | 第38页 |
| 4.10 大肠杆菌 TOP10 感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 4.11 DH10Bac 感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 4.12 重组 Bacmid 的产生 | 第39-41页 |
| 4.13 昆虫细胞的培养与保存 | 第41页 |
| 4.14 Bacmid 转染 Sf9 培养细胞 | 第41-42页 |
| 4.15 病毒的大量扩增 | 第42页 |
| 4.16 病毒的纯化 | 第42页 |
| 4.17 病毒滴度的测定 | 第42-43页 |
| 4.18 病毒的接种 | 第43页 |
| 4.19 家蚕组织解剖及样品处理 | 第43-44页 |
| 4.20 SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第44-45页 |
| 第三章 BmEcR-A 基因启动子活性研究 | 第45-60页 |
| 第一节 家蚕组织中 BmEcR-A 基因启动子活性分析 | 第45-53页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 引言 | 第45-46页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.2 质粒和菌株 | 第46页 |
| 1.3 实验方法 | 第46-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-52页 |
| 2.1 重组转移载体质粒的构建 | 第49-50页 |
| 2.2 重组 Bacmid 的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3 家蚕组织中 BmEcR-A 基因不同缺失片段的启动子活性 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 第二节 BmEcR-A 基因核心启动子分析 | 第53-60页 |
| 摘要 | 第53页 |
| 引言 | 第53-54页 |
| 1 材料和方法 | 第54-56页 |
| 1.1 材料及主要试剂 | 第54页 |
| 1.2 家蚕基因组 DNA 的提取 | 第54页 |
| 1.3 PCR 引物的设计 | 第54页 |
| 1.4 BmEcR-A 基因 5' 侧翼区片段的 PCR 扩增 | 第54页 |
| 1.5 启动子-Luciferase 报告质粒的构建 | 第54-55页 |
| 1.6 启动子突变体质粒的构建 | 第55页 |
| 1.7 细胞转染 | 第55页 |
| 1.8 细胞抽提物制备和双荧光素酶活性检测 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-58页 |
| 2.1 生物信息学分析 BmEcR-A 基因启动子 | 第56页 |
| 2.2 BmEcR-A 基因启动子报告载体的构建 | 第56-57页 |
| 2.3 BmEcR-A 基因启动子在 BmN 细胞中的启动子活性 | 第57-58页 |
| 2.4 BmEcR-A 基因启动子突变体的荧光素酶活性 | 第58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 家蚕蜕皮激素受体亚型 BmEcR-B1 基因启动子活性研究 | 第60-71页 |
| 第一节 家蚕组织中 BmEcR-B1 基因启动子活性分析 | 第60-65页 |
| 摘要 | 第60页 |
| 引言 | 第60页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 1.1 材料 | 第60页 |
| 1.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-65页 |
| 2.1 重组转移载体质粒的构建 | 第62-63页 |
| 2.2 重组 Bacmid 的鉴定 | 第63-64页 |
| 2.3 家蚕组织中不同片段缺失 BmEcR-B1 亚型启动子的活性 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65页 |
| 第二节 家蚕 BmEcR-B1 基因核心启动子分析 | 第65-71页 |
| 摘要 | 第65-66页 |
| 引言 | 第66页 |
| 1 材料和方法 | 第66-67页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第66页 |
| 1.2 家蚕基因组 DNA 的提取 | 第66页 |
| 1.3 PCR 引物的设计 | 第66-67页 |
| 1.4 BmEcR-B1 基因 5' 侧翼区片段的 PCR 扩增 | 第67页 |
| 1.5 启动子-Luciferase 报告质粒的构建 | 第67页 |
| 1.6 细胞转染 | 第67页 |
| 1.7 细胞抽提物制备和双荧光素酶活性检测 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-69页 |
| 2.1 生物信息学分析 BmEcR-B1 基因启动子 | 第67-68页 |
| 2.2 BmEcR-B1 基因启动子报告载体的构建 | 第68-69页 |
| 2.3 BmEcR-B1 基因启动子在 BmN 细胞中的转录活性 | 第69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 家蚕超气门蛋白基因启动子活性研究 | 第71-83页 |
| 第一节 家蚕组织中 BmUSP 基因启动子活性分析 | 第71-77页 |
| 摘要 | 第71页 |
| 引言 | 第71页 |
| 1 材料与方法 | 第71-73页 |
| 1.1 材料 | 第71页 |
| 1.2 实验方法 | 第71-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-76页 |
| 2.1 重组转移载体质粒的构建 | 第73-74页 |
| 2.2 重组 Bacmid 的鉴定 | 第74-75页 |
| 2.3 家蚕组织中不同缺失片段 BmUSP 基因启动子的活性 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-77页 |
| 第二节 家蚕 BmUSP 基因核心启动子活性分析 | 第77-83页 |
| 摘要 | 第77页 |
| 引言 | 第77页 |
| 1 材料和方法 | 第77-79页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第77页 |
| 1.2 家蚕基因组 DNA 的提取 | 第77-78页 |
| 1.3 PCR 引物的设计 | 第78页 |
| 1.4 BmUSP 基因 5' 侧翼区片段的 PCR 扩增 | 第78页 |
| 1.5 启动子-Luciferase 报告质粒的构建 | 第78页 |
| 1.6 细胞转染 | 第78-79页 |
| 1.7 细胞抽提物制备和双荧光素酶活性检测 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-81页 |
| 2.1 生物信息学分析 BmUSP 基因启动子 | 第79-80页 |
| 2.2 BmUSP 基因启动子报告载体的构建 | 第80页 |
| 2.3 BmUSP 基因启动子在 BmN 细胞中的转录活性 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| 第六章 家蚕 BmEcR-A 基因启动子重要调控区域的蛋白结合分析 | 第83-88页 |
| 摘要 | 第83页 |
| 引言 | 第83页 |
| 1 材料和方法 | 第83-84页 |
| 1.1 材料 | 第83页 |
| 1.2 核蛋白的抽提 | 第83页 |
| 1.3 启动子序列的合成 | 第83-84页 |
| 1.4 探针和蛋白结合反应 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-86页 |
| 2.1 蛋白与探针的结合反应 | 第84-85页 |
| 2.2 蛋白条带的质谱分析 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-88页 |
| 结论 | 第88-90页 |
| 1 研究结果 | 第88-90页 |
| 1.1 利用 rAcMNPV 作为基因介导的双荧光定量表达载体系统对家蚕 EcR、USP基因启动子在家蚕组织中的活性进行了分析 | 第88页 |
| 1.2 家蚕 BmN 细胞水平上进一步分析 BmEcR 和 BmUSP 基因核心启动子序列 | 第88页 |
| 1.3 家蚕 BmEcR-A 基因启动子核心调控序列的蛋白结合分析 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
