| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-13页 |
| 绪论 | 第13-19页 |
| 一、成纤维细胞生长因子(FGFs)及其受体(FGFRs)与肿瘤的关系 | 第13页 |
| 二、膀胱癌发病机制 | 第13-14页 |
| 三、单链抗体以及应用 | 第14-15页 |
| 四、siRNA 以及癌症治疗 | 第15-16页 |
| 五、重组蛋白原核表达系统 | 第16页 |
| 六、SUMO 融合表达系统 | 第16-17页 |
| 七、论文立题依据及设计思路 | 第17-19页 |
| 第一章 实验仪器，实验试剂以及基本实验方法 | 第19-28页 |
| 1.1 主要生化和分子生物学试剂 | 第19-21页 |
| 1.2 器材和主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.3 实验室常用溶液 | 第22-25页 |
| 1.3.1 SDS-PAGE 试剂 | 第22页 |
| 1.3.2 Western blot 试剂 | 第22-23页 |
| 1.3.3 细菌培养基 | 第23页 |
| 1.3.4 50×(Tris-乙酸）TAE | 第23页 |
| 1.3.5 100 mg/mLAmp 贮存液 | 第23页 |
| 1.3.6 蛋白纯化缓冲液 | 第23-25页 |
| 1.4 实验室常用方法 | 第25-28页 |
| 1.4.1 PCR 产物纯化 | 第25页 |
| 1.4.2 重组子的转化 | 第25-26页 |
| 1.4.3 质粒提取 | 第26页 |
| 1.4.4 蛋白定量（Thermo BCA 蛋白定量分析试剂盒） | 第26-28页 |
| 第二章 ScFv 及 ScFv-9R 目的基因的获得及和表达载体的构建 | 第28-36页 |
| 2.1 实验目的 | 第28页 |
| 2.2 实验原理 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 载体图谱信息 | 第28-29页 |
| 2.3.2 目的基因 ScFv 和 ScFv-9R 的合成及引物设计 | 第29页 |
| 2.3.3 PCR 方法将 Sumo 分别与 ScFv 和 ScFv-9R 拼接 | 第29-32页 |
| 2.3.4 将四个目的基因克隆到 pET-20b(+)载体上并测序 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-35页 |
| 2.4.1 PCR 电泳结果 | 第33页 |
| 2.4.2 目的基因酶切结果 | 第33页 |
| 2.4.3 载体酶切结果 | 第33-34页 |
| 2.4.4 重组质粒酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.4.5 目的基因的测序结果 | 第34-35页 |
| 2.5 实验小结 | 第35-36页 |
| 第三章 重组蛋白的表达与纯化 | 第36-48页 |
| 3.1 实验目的 | 第36页 |
| 3.2 实验原理 | 第36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-41页 |
| 3.3.1 重组蛋白表达条件的摸索 | 第36-37页 |
| 3.3.2 加 SUMO 与否的可溶性表达的变化分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 Western blot 检测 | 第39-40页 |
| 3.3.5 重组蛋白的酶切消化及纯化 | 第40页 |
| 3.3.6 目的蛋白浓度、纯度的检测及序列测序 | 第40-41页 |
| 3.4 实验结果 | 第41-47页 |
| 3.4.1 重组蛋白的表达 | 第41-43页 |
| 3.4.2 有无 SUMO 蛋白的可溶性表达情况分析 | 第43页 |
| 3.4.3 目的蛋白可溶性表达 | 第43-44页 |
| 3.4.4 两种目的蛋白纯化结果 | 第44页 |
| 3.4.5 Western Blot 检测结果 | 第44页 |
| 3.4.6 蛋白酶切去掉 SUMO | 第44-45页 |
| 3.4.7 两种目的蛋白纯度检测 | 第45-46页 |
| 3.4.8 ScFv-9R 蛋白质谱测序 | 第46-47页 |
| 3.5 实验小结 | 第47-48页 |
| 第四章 重组蛋白的活性检测 | 第48-54页 |
| 4.1 实验目的 | 第48页 |
| 4.2 实验原理 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.3.1 凝胶阻滞实验检测 ScFv-9R 与 siRNA 的结合情况 | 第48-49页 |
| 4.3.2 ScFv 与 RT112 细胞的靶向结合实验 | 第49页 |
| 4.3.3 ScFv-9R 携带 siRNA 进入 RT112 细胞 | 第49-50页 |
| 4.4 实验结果 | 第50-53页 |
| 4.4.1 ScFv-9R 与 siRNA 结合实验 | 第50-51页 |
| 4.4.2 ScFv-9R 与 RT112 细胞靶向结合实验 | 第51页 |
| 4.4.3 ScFv-9R 携带 siRNA 进入 RT112 细胞 | 第51-53页 |
| 4.5 实验小结 | 第53-54页 |
| 第五章 讨论 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 在读期间发表论文 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
