| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩写词表 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 植物中维生素C的功能、合成及代谢工程研究进展 | 第9-21页 |
| 1 AsA在植物体内的生理功能 | 第9-11页 |
| ·植物抗氧化系统 | 第9-10页 |
| ·光合作用和光保护 | 第10页 |
| ·参与其它物质的合成 | 第10页 |
| ·细胞壁代谢、细胞膨大和细胞分裂 | 第10-11页 |
| 2 植物中AsA的生物合成途径 | 第11-17页 |
| ·植物AsA的生物合成途径的阐明 | 第11-14页 |
| ·编码植物AsA合成途径中各反应催化酶基因的克隆和功能研究 | 第14-17页 |
| ·GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP) | 第14页 |
| ·GDP-D-甘露醇-3.5-差向异构酶(GME) | 第14-15页 |
| ·GDP-L-半乳糖鸟苷酰转移酶(GGT) | 第15页 |
| ·L-半乳糖-1-P-磷酸化酶(GGP) | 第15页 |
| ·L-半乳糖脱氢酶(GDH) | 第15-16页 |
| ·L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GLDH) | 第16-17页 |
| 3 植物中AsA的分解还原途径 | 第17页 |
| 4 植物AsA代谢的生物工程 | 第17-20页 |
| 5 展望 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·酶与试剂盒 | 第21页 |
| ·细菌和植物培养基 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第22页 |
| ·农杆菌培养基 | 第22页 |
| ·植物组织培养基 | 第22页 |
| ·抗生素配制 | 第22页 |
| ·引物合成与测序 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-33页 |
| ·编码拟南芥AsA合成途径中酶的基因的获得 | 第23-24页 |
| ·拟南芥叶片总RNA提取 | 第23页 |
| ·拟南芥叶片总RNA反转录为cDNA | 第23页 |
| ·使用KOD Plus进行PCR获得目的基因 | 第23-24页 |
| ·片段尾端加A | 第24页 |
| ·载体构建方法 | 第24-26页 |
| ·质粒抽提 | 第24页 |
| ·酶切 | 第24-25页 |
| ·连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第25页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第25页 |
| ·检测阳性转化子 | 第25-26页 |
| ·农杆菌培养与转化 | 第26页 |
| ·农杆菌培养 | 第26页 |
| ·农杆菌转化 | 第26页 |
| ·拟南芥的培养与转化 | 第26-28页 |
| ·拟南芥的播种与培养 | 第26-27页 |
| ·拟南芥转化 | 第27-28页 |
| ·转基因拟南芥的分子检测 | 第28-31页 |
| ·转基因拟南芥DNA的抽提 | 第28页 |
| ·转基因拟南芥基因组DNA的PCR分析 | 第28页 |
| ·拟南芥组织总RNA小量抽提 | 第28-29页 |
| ·反转录 | 第29页 |
| ·实时定量PCR | 第29-31页 |
| ·HPLC检测维生素C含量 | 第31-33页 |
| ·样品处理 | 第31页 |
| ·高效液相(HPLC)条件 | 第31页 |
| ·绘制标准曲线 | 第31-32页 |
| ·测定样品AsA含量 | 第32-33页 |
| 第三章 拟南芥合成途径双基因转化 | 第33-46页 |
| 1 拟南芥AsA合成途径基因的克隆和单基因载体构建 | 第33-37页 |
| ·基因特异引物的设计 | 第33页 |
| ·基因编码区的克隆 | 第33-35页 |
| ·基因点突变 | 第35-37页 |
| ·植物单基因表达载体的构建 | 第37页 |
| 2 植物双基因表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·基因表达框引物的设计 | 第37-38页 |
| ·基因编码区的克隆 | 第38页 |
| ·植物双基因表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3 拟南芥的转化和阳性植株的获得 | 第39-40页 |
| ·农杆菌的转化 | 第39页 |
| ·拟南芥的转化和筛选 | 第39页 |
| ·拟南芥的分子鉴定 | 第39-40页 |
| 4 转基因拟南芥中基因表达量的分析 | 第40-44页 |
| ·实时定量PCR的引物设计 | 第40-42页 |
| ·编码AsA生物合成途径中各酶的基因的总表达量的分析 | 第42-44页 |
| 5 HPLC测定转基因拟南芥AsA含量 | 第44-46页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第46-49页 |
| 1 研究总结 | 第46-48页 |
| 2 研究创新点 | 第48页 |
| 3 后续的研究方向 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| Ⅰ 载体图谱 | 第55-56页 |
| Ⅱ 实验中用到的主要仪器 | 第56-57页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
