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向日葵耐盐调控机制及其盐胁迫应答基因克隆与功能验证的研究

摘要第3-5页
abstract第5-7页
1 引言第15-31页
    1.1 向日葵概况第15页
    1.2 植物耐盐调控机制第15-23页
        1.2.1 植物耐盐调控的生理生化机制第16-17页
        1.2.2 植物耐盐调控的分子机制第17-23页
    1.3 非损伤微测技术在植物生理学应用研究进展第23-25页
        1.3.1 非损伤微测技术在植物生理学上应用的优势第23页
        1.3.2 非损伤微测技术在盐胁迫下植物细胞离子流变化研究进展第23-25页
    1.4 高通量测序在基因挖掘上的应用第25-27页
        1.4.1 测序技术的发展第25-26页
        1.4.2 基于转录组测序的基因克隆的研究进展第26-27页
    1.5 向日葵耐盐相关研究进展第27-28页
    1.6 本研究的内容与目的意义第28-31页
        1.6.1 本研究的内容第28-29页
        1.6.2 本研究的目的意义第29-30页
        1.6.3 本研究总体技术路线第30-31页
2 油葵杂交种苗期耐盐性鉴定及对盐胁迫的生理响应第31-43页
    2.1 试验材料第31-32页
        2.1.1 植物材料第31页
        2.1.2 主要试剂第31页
        2.1.3 主要试剂配制第31页
        2.1.4 主要仪器设备第31-32页
    2.2 试验方法第32-33页
        2.2.1 材料培养第32页
        2.2.2 土培NaCl胁迫处理第32页
        2.2.3 水培NaCl胁迫处理第32页
        2.2.4 杂交种耐盐性鉴定第32-33页
        2.2.5 生理生化指标测定第33页
        2.2.6 统计分析第33页
    2.3 结果与分析第33-40页
        2.3.1 土培NaCl胁迫处理油葵杂交种耐盐性比较第34页
        2.3.2 水培NaCl胁迫处理油葵杂交种耐盐性比较第34-35页
        2.3.3 油葵杂交种NaCl胁迫方法与浓度效应比较第35页
        2.3.4 油葵杂交种苗期耐盐性鉴定第35页
        2.3.5 不同浓度NaCl胁迫处理对向日葵苗期耐盐性生理生化指标的影响..第35-39页
        2.3.6 不同浓度 NaCl 胁迫处理 P50 和 P29 各项生理指标间的差异显著性分析第39-40页
    2.4 结论与讨论第40-42页
        2.4.1 耐盐性鉴定评价方法的选择第40页
        2.4.2 向日葵耐盐性鉴定生理生化指标的选择第40-41页
        2.4.3 向日葵品种苗期耐盐性差异第41-42页
    2.5 小结第42-43页
3 向日葵离子转运的耐盐性生理机制第43-51页
    3.1 试验材料第43页
        3.1.1 植物材料第43页
        3.1.2 主要试剂第43页
        3.1.3 主要仪器设备第43页
    3.2 试验方法第43-45页
        3.2.1 试验材料处理第44页
        3.2.2 离子流测定第44-45页
    3.3 结果与分析第45-46页
        3.3.1 盐胁迫条件下向日葵根尖Na~+流的变化第45页
        3.3.2 盐胁迫条件下向日葵根尖K~+流的变化第45-46页
        3.3.3 盐胁迫条件下向日葵根尖H~+流的变化第46页
    3.4 结论与讨论第46-50页
        3.4.1 非损伤微测技术测定离子流根尖部位和测定时间的选择第46-47页
        3.4.2 盐胁迫对向日葵幼苗根系Na~+和K~+吸收的影响第47-49页
        3.4.3 盐胁迫对向日葵幼苗根系Na~+和H~+吸收的影响第49-50页
    3.5 小结第50-51页
4 向日葵响应盐胁迫差异表达基因的筛选第51-68页
    4.1 试验材料第52-53页
        4.1.1 表达谱测序数据及样品第52页
        4.1.2 主要试剂第52-53页
        4.1.3 主要仪器设备第53页
    4.2 试验方法第53-57页
        4.2.1 DEGs的筛选与分析第53页
        4.2.2 向日葵响应盐胁迫关键DEGs的筛选第53-54页
        4.2.3 向日葵响应盐胁迫关键基因的GO功能注释和KEGG通路分析第54页
        4.2.4 盐胁迫向日葵DGE测序数据的qPCR验证第54-57页
    4.3 结果与分析第57-65页
        4.3.1 差异表达基因的筛选第57-58页
        4.3.2 向日葵响应盐胁迫关键基因的筛选第58-61页
        4.3.3 向日葵响应盐胁迫关键基因的GO功能注释和KEGG通路分析第61-63页
        4.3.4 qPCR验证第63-65页
    4.4 结论与讨论第65-66页
        4.4.1 利用转录组与表达谱结合筛选差异表达基因第65-66页
        4.4.2 向日葵响应盐胁迫关键基因的筛选第66页
    4.5 小结第66-68页
5 向日葵V-ATPasea3亚基基因V-ATPasea3的克隆及表达分析第68-87页
    5.1 试验材料第68-69页
        5.1.1 植物材料第68页
        5.1.2 主要试剂第68-69页
        5.1.3 主要试剂配制第69页
        5.1.4 主要仪器设备第69页
    5.2 试验方法第69-76页
        5.2.1 试验材料处理第69-70页
        5.2.2 引物设计与合成第70页
        5.2.3 总RNA的提取及cDNA合成第70页
        5.2.4 V-ATPasea3的cDNA已知序列验证第70-72页
        5.2.5 V-ATPasea3的全长cDNA克隆第72-75页
        5.2.6 V-ATPasea3cDNA开放阅读框克隆第75-76页
        5.2.7 V-ATPasea3的生物信息学分析第76页
        5.2.8 V-ATPasea3的表达分析第76页
    5.3 结果与分析第76-84页
        5.3.1 V-ATPasea3cDNA已知序列验证第76-77页
        5.3.2 V-ATPasea3cDNA全长序列的克隆第77-78页
        5.3.3 V-ATPasea3cDNA的生物信息学分析第78-81页
        5.3.4 V-ATPasea3的表达分析第81-84页
    5.4 结论与讨论第84-86页
        5.4.1 V-ATPasea3扩增模板的选择第84-85页
        5.4.2 V-ATPase与植物耐盐性第85页
        5.4.3 V-ATPasea亚基基因在植物抗盐中的作用第85页
        5.4.4 V-ATPasea3响应非生物胁迫的表达模式第85-86页
    5.5 小结第86-87页
6 向日葵E3泛素连接酶基因HERC2的克隆及亚细胞定位第87-102页
    6.1 试验材料第87-88页
        6.1.1 植物材料第87-88页
        6.1.2 主要试剂第88页
        6.1.3 主要试剂配制第88页
        6.1.4 主要仪器设备第88页
    6.2 试验方法第88-93页
        6.2.1 试验材料的处理第88页
        6.2.2 引物设计与合成第88-89页
        6.2.3 HERC2cDNA和gDNA开放阅读框的克隆第89-90页
        6.2.4 HERC2亚细胞定位第90-93页
    6.3 结果与分析第93-99页
        6.3.1 HERC2cDNA和gDNA开放阅读框克隆第93-94页
        6.3.2 HERC2cDNA和gDNA序列的生物信息学分析第94-98页
        6.3.3 HERC2瞬时表达载体载体的构建第98-99页
        6.3.4 HERC2亚细胞定位观察结果第99页
    6.4 结论与讨论第99-101页
        6.4.1 HERC2的克隆依据第100页
        6.4.2 E3泛素连接酶与向日葵耐盐性第100页
        6.4.3 融合报告基因的蛋白质亚细胞定位第100-101页
    6.5 小结第101-102页
7 HERC2的表达分析及功能验证第102-117页
    7.1 试验材料第102-103页
        7.1.1 植物材料第102页
        7.1.2 菌株和质粒第102-103页
        7.1.3 主要试剂和仪器设备第103页
        7.1.4 主要试剂配制第103页
    7.2 试验方法第103-107页
        7.2.1 引物设计与合成第103-104页
        7.2.2 HERC2的表达分析第104页
        7.2.3 HERC2植物表达载体构建第104-105页
        7.2.4 HERC2的功能验证第105-107页
    7.3 结果与分析第107-114页
        7.3.1 HERC2的表达分析第107-110页
        7.3.2 HERC2植物表达载体的构建第110-112页
        7.3.3 HERC2的功能验证第112-114页
    7.4 结论与讨论第114-116页
        7.4.1 向日葵HERC2响应非生物胁迫的表达第115页
        7.4.2 E3泛素连接酶与植物抗逆性第115-116页
    7.5 小结第116-117页
8 结论与展望第117-121页
    8.1 结论第117-119页
    8.2 创新点第119页
    8.3 工作展望第119-121页
致谢第121-122页
参考文献第122-137页
作者简介第137-138页

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