| 中文摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 实验材料 | 第10-17页 |
| 1. 实验动物和细胞株 | 第10页 |
| 2. 基因和引物 | 第10-14页 |
| 3. 抗体 | 第14页 |
| 4. 试剂盒 | 第14-15页 |
| 5. 其他试剂 | 第15-16页 |
| 6. 实验仪器 | 第16-17页 |
| 实验方法 | 第17-29页 |
| 1. 实验流程图 | 第17-18页 |
| 2. 第一步 建立大鼠3-NPA脑缺血耐受模型 | 第18-19页 |
| 2.1 动物分组 | 第18页 |
| 2.2 3-NPA溶液配制 | 第18页 |
| 2.3 MCAO手术过程 | 第18-19页 |
| 2.4 NSS评分 | 第19页 |
| 2.5 脑梗死体积测定 | 第19页 |
| 3. 第二步 检测3-NPA脑缺血耐受中miR-199a及其靶基因变化 | 第19-29页 |
| 3.1 动物分组及给药 | 第19页 |
| 3.2 动物处死及取脑 | 第19-20页 |
| 3.3 脑组织中总RNA提取 | 第20-21页 |
| 3.4 RT-PCR将RNA反转录为cDNA | 第21-22页 |
| 3.5 Real-time PCR | 第22-23页 |
| 3.6 脑组织中总蛋白质提取 | 第23页 |
| 3.7 蛋白质浓度测定 | 第23-24页 |
| 3.8 Western Blotting | 第24-27页 |
| 3.9 HeLa细胞氯化钻诱导实验 | 第27-29页 |
| 实验结果 | 第29-41页 |
| 1. 构建大鼠3-NPA腹腔注射的化学脑缺血耐受模型 | 第29-31页 |
| 1.1 3-NPA腹腔注射可使大鼠MCAO术后NSS评分显著降低 | 第29-30页 |
| 1.2 3-NPA腹腔注射可使大鼠MCAO术后24小时的脑梗死体积显著减小 | 第30-31页 |
| 2. 总RNA质量检测及浓度测定 | 第31页 |
| 3. 验证Realtime PCR引物的特异性 | 第31-32页 |
| 4. 3-NPA腹腔注射后大鼠脑组织中miR-199a的表达变化 | 第32-36页 |
| 4.1 大鼠脑皮质中miR-199a的表达在3-NPA注射后第2和第4天发生下调 | 第32-33页 |
| 4.2 大鼠纹状体中miR-199a的表达在3-NPA注射后第2和第4、5天发生下调 | 第33-35页 |
| 4.3 大鼠海马中miR-199a的表达在3-NPA注射后第2天发生下调 | 第35-36页 |
| 5. 3-NPA腹腔注射后大鼠脑皮质中miR-199a预测靶基因的表达变化 | 第36-41页 |
| 5.1 3-NPA预处理后HIF-1α的mRNA表达无明显变化 | 第36-37页 |
| 5.2 3-NPA预处理后HIF-1α蛋白表达上调 | 第37-38页 |
| 5.3 3-NPA预处理后Sirt1的mRNA表达无明显变化 | 第38-39页 |
| 5.4 3-NPA预处理后Sirt1蛋白表达上调 | 第39页 |
| 5.5 3-NPA预处理后VEGFA的mRNA表达无明显变化 | 第39-40页 |
| 5.6 3-NPA预处理后VEGFA蛋白表达上调 | 第40-41页 |
| 讨论 | 第41-46页 |
| 1. 3-NPA腹腔注射可成功诱导大鼠产生脑缺血耐受 | 第41页 |
| 2. 3-NPA诱导脑缺血耐受过程中miR-199a表达发生下调 | 第41-42页 |
| 3. 3-NPA诱导脑缺血耐受过程中脑组织不同部位miR-199a的表达变化存在差异 | 第42-44页 |
| 4. HIF-1α、Sirt1和VEGFA可能是miR-199a在3-NPA预处理过程中的作用靶点 | 第44-45页 |
| 5. 本课题存在的不足与下一步研究方向 | 第45-46页 |
| 小结 | 第46-47页 |
| 综述 | 第47-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 英文缩略语 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-70页 |
| AppendixⅠ NSS评分表 | 第67-68页 |
| AppendixⅡ 总RNA浓度及0D260/280值 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简历 | 第71页 |
