| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-18页 |
| 1 研究问题的由来 | 第11-13页 |
| 2 国内外研究现状及分析 | 第13-17页 |
| 2.1 微生物降解甲基对硫磷的机制 | 第15-17页 |
| 2.2 相关基因工程菌的研究现状 | 第17页 |
| 3 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 材料与方法 | 第18-40页 |
| 1 实验材料 | 第18-21页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第18页 |
| 1.2 培养基 | 第18-19页 |
| 1.3 试剂 | 第19-20页 |
| 1.4 试剂盒和酶 | 第20页 |
| 1.5 主要仪器 | 第20-21页 |
| 1.6 供试材料 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-40页 |
| 2.1 菌株培养 | 第21页 |
| 2.2 甲基对硫磷降解菌Hn的鉴定 | 第21-24页 |
| 2.2.1 生理生化鉴定 | 第21页 |
| 2.2.2 16SrRNA的鉴定 | 第21-24页 |
| 2.3 Hn对甲基对硫磷的降解性能 | 第24页 |
| 2.4 菌株Hn分子水平研究及mpd的表达 | 第24-28页 |
| 2.4.1 甲基对硫磷降解基因的定位 | 第24-25页 |
| 2.4.2 甲基对硫磷降解基因mpd的克隆表达 | 第25-26页 |
| 2.4.3 降解质粒序列的研究 | 第26-28页 |
| 2.5 融合质粒pWB6的构建 | 第28-33页 |
| 2.5.1 质粒pUC19-egfp的构建 | 第29-30页 |
| 2.5.2 质粒pUC19-egfp-kam的构建 | 第30页 |
| 2.5.3 质粒pUC19-egfp-kam-PrpsL的构建 | 第30-31页 |
| 2.5.4 质粒pUC19-egfp-kam-PrpsL-mpd的构建 | 第31页 |
| 2.5.5 融合质粒pBHR1-pUC19-egfp-kam-PrpsL-mpd的构建 | 第31-33页 |
| 2.6 多功能工程菌X3的构建 | 第33页 |
| 2.7 X3性能检测 | 第33-35页 |
| 2.7.1 标记工程菌与出发工程菌生长特动态的比较 | 第34页 |
| 2.7.2 X3中egfp的表达 | 第34页 |
| 2.7.3 外源质粒的稳定性 | 第34-35页 |
| 2.7.4 X3对MP的降解能力 | 第35页 |
| 2.7.5 X3对重金属的抗性研究 | 第35页 |
| 2.7.6 X3在MP和Cd~(2+)同时污染下的功能研究 | 第35页 |
| 2.8 X3对模拟污染土壤的修复作用 | 第35-40页 |
| 2.8.1 土壤中工程菌的存活能力检测 | 第36-38页 |
| 2.8.2 高效液相色谱法检测MP的降解 | 第38页 |
| 2.8.3 重金属的连续提取法检测土壤中Cd~(2+)的形态变化 | 第38-40页 |
| 实验结果与分析 | 第40-66页 |
| 1 降解菌Hn,Hk的鉴定 | 第40-42页 |
| 1.1 菌落形态观察 | 第40页 |
| 1.2 降解菌的生理生化鉴定结果(均以E.coli作为对照菌) | 第40-42页 |
| 1.3 16SrRNA分子鉴定结果 | 第42页 |
| 2 降解菌P.putida Hn对MP的降解能力 | 第42-43页 |
| 3 P.putida Hn MP降解的分子研究 | 第43-47页 |
| 3.1 mpd基因的获得和验证 | 第43-45页 |
| 3.2 甲基对硫磷水解酶的表达 | 第45-46页 |
| 3.3 降解质粒的分子研究 | 第46-47页 |
| 4 工程菌的构建 | 第47-54页 |
| 4.1 质粒pUC19-egfp的构建 | 第50页 |
| 4.2 质粒pUC19-egfp-kam的构建 | 第50-51页 |
| 4.3 质粒pUC19-egfp-kam-PrpsL的构建 | 第51-53页 |
| 4.4 质粒pUC19-egfp-kam-PrpsL-mpd的构建 | 第53页 |
| 4.5 融合质粒pBHRl-pUC19-egfp-kam-PrpsL-mpd(pWB6)的构建 | 第53-54页 |
| 4.6 工程菌X3的构建 | 第54页 |
| 5 工程菌的检测 | 第54-60页 |
| 5.1 标记工程菌生长趋势和抗性图谱的测定 | 第54-56页 |
| 5.2 X3中egfp的表达 | 第56-57页 |
| 5.3 外源质粒的稳定性 | 第57页 |
| 5.4 X3对MP的降解能力 | 第57-58页 |
| 5.5 X3对重金属的抗性研究 | 第58-59页 |
| 5.6 X3在两种污染MP和Cd~(2+)同时存在下的功能性 | 第59-60页 |
| 6 在模拟的污染土壤中X3的修复检测 | 第60-66页 |
| 6.1 多功能工程菌X3在土壤中的存活能力 | 第60-64页 |
| 6.1.1 通过平板计数法监测土壤中X3的活菌数 | 第60-62页 |
| 6.1.2 土壤中的荧光量反映X3菌数 | 第62-63页 |
| 6.1.3 荧光定量PCR检测土壤中X3的菌数 | 第63-64页 |
| 6.2 高效液相色谱法检测X3在土壤中对MP的降解能力 | 第64-65页 |
| 6.3 连续提取法测定重金属Cd~(2+)形态变化 | 第65-66页 |
| 小结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
