| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 棉花黄萎病的概况 | 第9页 |
| 1.2 棉花黄萎病的病原菌 | 第9页 |
| 1.3 棉花黄萎病菌的致病机理 | 第9-12页 |
| 1.3.1 棉花黃萎病的致病机理假说 | 第9-10页 |
| 1.3.2 棉花黄萎病菌致病的分子机理 | 第10-12页 |
| 1.4 农杆菌介导的转化技术(Agrobacterium tumefaciens- Mediated Transformation, ATMT)在突变体的构建和功能基因研究中的应用 | 第12-13页 |
| 1.5 T-DNA插入位点侧翼序列的获得和序列分析 | 第13-14页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 3.材料与方法 | 第16-25页 |
| 3.1 实验材料 | 第16-17页 |
| 3.2 实验方法 | 第17-25页 |
| 3.2.1 棉花黄萎菌突变体生物学筛选 | 第17-18页 |
| 3.2.1.1 转化子的活化、单孢分离与保存 | 第17页 |
| 3.2.1.2 转化子抗潮霉素稳定性测定 | 第17页 |
| 3.2.1.3 生长速度和产微菌核能力的测定及菌落形态的观察 | 第17页 |
| 3.2.1.4 水琼脂平板菌落观察 | 第17页 |
| 3.2.1.5 致病力测定 | 第17-18页 |
| 3.2.1.6 黄萎病菌分生孢子萌发观察 | 第18页 |
| 3.2.1.7 突变体V181的营养补充 | 第18页 |
| 3.2.2 棉花黃萎菌突变体侧翼序列的获得 | 第18-25页 |
| 3.2.2.1 大丽轮枝菌基因组DNA | 第18-19页 |
| 3.2.2.2 突变体特异性检测 | 第19页 |
| 3.2.2.3 突变体潮霉素抗性检测 | 第19页 |
| 3.2.2.4 hiTAIL-PCR检测 | 第19-23页 |
| 3.2.2.5 hiTAIL-PCR产物胶回收 | 第23页 |
| 3.2.2.6 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第23-24页 |
| 3.2.2.7 目的片段的克隆 | 第24页 |
| 3.2.2.8 目标片段的测序与序列分析 | 第24-25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-36页 |
| 4.1 黃萎病菌突变体生物学特性测定结果 | 第25-32页 |
| 4.1.1 黄萎病菌T-DNA插入转化子单孢分离及保存 | 第25页 |
| 4.1.2 黄萎病菌T-DNA插入转化子潮霉素抗性测定 | 第25页 |
| 4.1.3 黄萎病菌T-DNA插入突变体菌落形态观察 | 第25-26页 |
| 4.1.4 生长速度明显减慢的黄萎病菌T-DNA插入转化子的筛选 | 第26-27页 |
| 4.1.5 水琼脂培养基缺陷性突变体的筛选 | 第27页 |
| 4.1.6 突变体的显微形态与孢子萌发观察 | 第27-28页 |
| 4.1.7 突变体V181的营养补充 | 第28页 |
| 4.1.8 黄萎病菌T-DNA插入转化子致病力鉴定 | 第28-32页 |
| 4.2 黃萎菌T-DNA插入突变体的PCR检测 | 第32-36页 |
| 4.2.1 黃萎菌T-DNA插入突变体的基因组特异序列扩增 | 第32页 |
| 4.2.2 突变体对潮霉素抗性的分子检测 | 第32-33页 |
| 4.2.3 hiTAIL-PCR扩增T-DNA插入突变体的侧端序列 | 第33-35页 |
| 4.2.4 黃萎病菌T-DNA插入突变体侧翼序列的分析 | 第35-36页 |
| 5 结论与讨论 | 第36-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| ABSTRACT | 第45-46页 |
| 附录 1 | 第47-52页 |
