| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 常用中英文缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1 引言 | 第16页 |
| 2 PI3K/Akt信号通路在能量代谢过程中的作用 | 第16-18页 |
| 3 GPR120基因在能量代谢过程中的作用简介 | 第18-21页 |
| 4 miRNAs调控能量代谢的研究 | 第21-30页 |
| 4.1 mi RNAs的生物合成与作用机制 | 第21-23页 |
| 4.2 mi RNAs调节胰腺的胰岛素分泌 | 第23页 |
| 4.3 mi RNAs调节肝脏的脂质和胆固醇代谢 | 第23-26页 |
| 4.4 mi RNAs参与调节葡萄糖代谢和胰岛素作用的过程 | 第26-27页 |
| 4.5 mi RNAs参与调节脂肪组织的能量消耗 | 第27-30页 |
| 5 基因的转录调控研究简介 | 第30-32页 |
| 6 目的与意义 | 第32-34页 |
| 第二章 猪GPR120基因的转录调控机制研究 | 第34-65页 |
| 前言 | 第34-35页 |
| 1 材料与方法 | 第35-51页 |
| 1.1 实验动物和样品 | 第35页 |
| 1.2 细胞系和菌株 | 第35页 |
| 1.3 载体 | 第35-37页 |
| 1.4 主要仪器和设备 | 第37-38页 |
| 1.5 主要试剂与试剂盒 | 第38-39页 |
| 1.6 常用试剂及配制 | 第39页 |
| 1.7 细胞总RNA的提取及c DNA的合成 | 第39-40页 |
| 1.8 Q-PCR | 第40-42页 |
| 1.9 猪GPR120基因 5′端上游调控区域序列的克隆 | 第42-43页 |
| 1.10 猪GPR120基因 5′端上游调控区域的调控元件预测 | 第43页 |
| 1.11 猪GPR120基因 5′端上游调控区域的缺失片段活性检测 | 第43-44页 |
| 1.11.1 细胞的复苏 | 第43页 |
| 1.11.2 细胞的培养 | 第43页 |
| 1.11.3 细胞的冻存 | 第43-44页 |
| 1.11.4 细胞的转染 | 第44页 |
| 1.11.5 双荧光素酶活性的检测 | 第44页 |
| 1.12 猪GPR120基因 5′端上游调控区域转录因子的验证 | 第44-51页 |
| 1.12.1 转录因子的预测及分析 | 第44-45页 |
| 1.12.2 转录因子结合位点突变载体构建 | 第45页 |
| 1.12.3 质粒共转染 | 第45页 |
| 1.12.4 Ch IP | 第45-48页 |
| 1.12.5 RNA干扰 | 第48页 |
| 1.12.6 Western blotting | 第48-50页 |
| 1.12.7 蛋白浓度的测定 | 第50-51页 |
| 1.13 应用到的生物信息学网站及分析软件 | 第51页 |
| 1.14 统计学分析 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-63页 |
| 2.1 猪GPR120基因启动子区域的分析 | 第51-52页 |
| 2.2 猪GPR120基因启动子区域缺失载体的荧光活性分析 | 第52-53页 |
| 2.3 猪GPR120基因核心启动子的转录调控元件分析 | 第53-54页 |
| 2.4 猪GPR120基因核心启动子区域转录因子C/EBPβ 结合位点的验证 | 第54-56页 |
| 2.5 转录因子C/EBPβ 与GPR120基因启动子结合情况的验证 | 第56-57页 |
| 2.6 超表达转录因子C/EBPβ 促进GPR120基因的表达 | 第57-59页 |
| 2.7 干涉转录因子C/EBPβ 抑制GPR120基因的表达 | 第59-61页 |
| 2.8 高能饲喂（HFD）诱导小鼠转录因子C/EBPβ 表达并影响GPR120基因转录 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 第三章 miR-25 对肌肉细胞能量代谢的抑制作用研究 | 第65-86页 |
| 前言 | 第65-66页 |
| 1 材料与方法 | 第66-78页 |
| 1.1 载体和菌株 | 第66页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第66-67页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第67页 |
| 1.4 细胞培养及诱导分化 | 第67-68页 |
| 1.4.1 细胞的复苏 | 第67页 |
| 1.4.2 细胞的常规培养 | 第67页 |
| 1.4.3 细胞的冻存 | 第67页 |
| 1.4.4 C2C12细胞的诱导分化 | 第67-68页 |
| 1.5 细胞转染及细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第68页 |
| 1.6 细胞总RNA的提取及c DNA的合成 | 第68页 |
| 1.7 Q-PCR分析 | 第68-71页 |
| 1.7.1 mi RNA的定量分析 | 第68-70页 |
| 1.7.2 基因的定量分析 | 第70-71页 |
| 1.8 靶基因预测以及预测靶基因 3’UTR | 第71页 |
| 1.9 靶基因 3’UTR双荧光素酶报告载体的构建 | 第71-76页 |
| 1.9.1 靶基因 3’UTR序列的引物设计和克隆 | 第72-74页 |
| 1.9.2 普通质粒小提 | 第74-75页 |
| 1.9.3 靶基因 3’UTR序列的质粒双酶切 | 第75页 |
| 1.9.4 载体的构建 | 第75页 |
| 1.9.5 去内毒素质粒抽提 | 第75-76页 |
| 1.9.6 载体的鉴定 | 第76页 |
| 1.10 靶基因 3’UTR突变型双荧光素酶报告载体的构建 | 第76-77页 |
| 1.11 靶基因的鉴定 | 第77页 |
| 1.12 Western blotting分析 | 第77页 |
| 1.13 主要数据库及分析软件 | 第77-78页 |
| 1.14 统计学分析 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-84页 |
| 2.0 mi R-25 序列保守性分析 | 第78-79页 |
| 2.1 mi R253p在C2C12成肌细胞分化过程中的表达谱分析 | 第79页 |
| 2.2 超表达mi R253p对C2C12成肌细胞能量代谢的影响 | 第79-80页 |
| 2.3 mi R-25 靶基因的鉴定 | 第80-82页 |
| 2.4 mi R253p对靶基因Akt1的调控作用 | 第82-84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| 第四章 miR-25 转录调控机制的研究 | 第86-104页 |
| 前言 | 第86页 |
| 1 材料与方法 | 第86-90页 |
| 1.1 载体、菌株和细胞 | 第86页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第86-87页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第87页 |
| 1.4 细胞培养及诱导分化 | 第87页 |
| 1.5 细胞转染及细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第87页 |
| 1.6 细胞总RNA的提取及c DNA的合成 | 第87页 |
| 1.7 Q-PCR分析 | 第87页 |
| 1.8 小鼠mi R-25 的 5′端上游调控区域序列的扩增 | 第87-89页 |
| 1.9 转录因子AP-2α 真核超表达载体的构建 | 第89页 |
| 1.9.1 AP-2α 的CDS序列引物设计 | 第89页 |
| 1.9.2 AP-2α 的CDS的扩增、克隆、质粒提取、双酶切 | 第89页 |
| 1.10 应用到的生物信息学网站及分析软件 | 第89页 |
| 1.11 mmu-mi R-25 的 5′端上游调控区域的缺失分析 | 第89-90页 |
| 1.12 mmu-mi R-25 的 5′端上游调控区域转录因子分析 | 第90页 |
| 1.13 统计学分析 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-102页 |
| 2.1 mmu-mi R-25 启动子区域缺失载体的构建 | 第90-91页 |
| 2.2 mmu-mi R-25 启动子区域缺失载体的荧光活性分析 | 第91-92页 |
| 2.3 mmu-mi R-25 核心启动子区域转录调控元件的分析 | 第92-93页 |
| 2.4 mmu-mi R-25 核心启动子区域转录因子AP-2α 结合位点的验证 | 第93-95页 |
| 2.5 转录因子AP-2α 与mmu-mi R-25 启动子结合情况的验证 | 第95-96页 |
| 2.6 构建转录因子AP-2α 真核超表达载体pc-AP-2α | 第96-97页 |
| 2.7 超表达转录因子AP-2α 促进mmu-mi R-25 的转录表达 | 第97-100页 |
| 2.8 干涉转录因子AP-2α 抑制mmu-mi R-25 的转录表达 | 第100-102页 |
| 3 讨论 | 第102-104页 |
| 总结 | 第104页 |
| 主要创新点 | 第104页 |
| 进一步研究的建议 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-123页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
