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小麦纹枯病菌效应因子的分离及功能研究

中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 引言第12-25页
    1.1 小麦纹枯病综述第12-17页
        1.1.1 小麦纹枯病症状第12-13页
        1.1.2 小麦纹枯病菌的种类第13页
        1.1.3 小麦纹枯病菌的生理生态第13-14页
        1.1.4 小麦纹枯病菌的生物学特性第14页
        1.1.5 小麦纹枯病发病规律和影响发病的因素第14-16页
            1.1.5.1 发病规律第14-15页
            1.1.5.2 影响发病因素第15-16页
        1.1.6 小麦纹枯病害的综合防治措施第16-17页
    1.2.碳水化合物活性酶综述第17-18页
        1.2.1 碳水化合物类活性酶的组成及其功能第18页
    1.3.病原微生物与寄主植物互作的研究第18-23页
        1.3.1 植物的免疫系统第18-20页
        1.3.2 PAMPs诱导的植物免疫反应(PTI)第20页
        1.3.3 效应因子诱导的植物免疫反应(ETI)第20-23页
    1.4 真菌分泌蛋白的研究进展第23页
    1.5 立题依据及研究的目的和意义第23-25页
2 材料与方法第25-37页
    2.1 材料第25-26页
        2.1.1 所用小麦品种及纹枯病病原菌菌株第25页
        2.1.2 所用主要试剂第25页
        2.1.3 所用培养基第25页
        2.1.4 所用主要生化试剂盒第25-26页
        2.1.5 所用主要仪器设备第26页
    2.2 方法第26-37页
        2.2.1 小麦纹枯病病原菌的采集与分离培养第26页
            2.2.1.1 小麦纹枯病病原菌的采集第26页
            2.2.1.2 小麦纹枯病菌的分离培养第26页
        2.2.2 小麦纹枯病的接种及侵染过程第26-27页
        2.2.3 小麦纹枯病病原菌的形态学观察以及分子鉴定第27-28页
            2.2.3.1 小麦纹枯病病原菌的形态学观察第27页
            2.2.3.2 小麦纹枯病病原菌 5.8S rDNA-ITS区序列分析第27-28页
        2.2.4 小麦体内活性氧的染色检测第28页
        2.2.5 小麦体内Caspase3-like活性检测第28页
        2.2.6 禾谷丝核菌候选效应因子的PCR扩增第28-30页
        2.2.7 禾谷丝核菌基因组DNA的提取:第30页
        2.2.8 禾谷丝核菌基因组RNA的提取:第30-31页
        2.2.9 禾谷丝核菌候选效应因子cDNA第一链的合成第31页
        2.2.10 候选效应因子PCR扩增产物回收第31-32页
        2.2.11 候选效应因子cDNA片段的连接第32页
        2.2.12 候选效应因子cDNA片段的转化第32页
        2.2.13 候选效应因子cDNA片段的单克隆PCR检测第32-33页
        2.2.14 候选效应因子cDNA片段的序列测定与分析第33页
        2.2.15 阳性单克隆菌液质粒的提取第33页
        2.2.16 质粒以及原核表达载体的双酶切反应第33页
        2.2.17 目的基因与表达载体片段的连接及表达菌株的获得第33-34页
        2.2.18 候选效应因子融合蛋白的诱导表达第34页
        2.2.19 候选效应因子融合蛋白的SDS-PAGE电泳第34-35页
        2.2.20 SDS-PAGE蛋白质电泳胶的染色与脱色第35页
        2.2.21 包涵体的溶解和复性第35页
        2.2.22 复性蛋白的纯化回收第35-36页
        2.2.23 效应因子融合蛋白对离体小麦叶片的致病性鉴定第36-37页
3 实验结果第37-47页
    3.1 小麦纹枯病病原菌的培养特征第37页
    3.2 温麦6受禾谷丝核菌WK207侵染后病情的动态发展变化第37-38页
    3.3 利用扫描电镜观察禾谷丝核菌WK207对温麦6的侵染过程第38-40页
    3.4 受侵染的温麦6中ROS变化第40-41页
    3.5 受侵染的温麦6中Caspase3-like的活性变化第41页
    3.6 小麦纹枯病菌总RNA的提取第41-42页
    3.7 禾谷丝核菌候选效应因子基因的PCR扩增第42-43页
    3.8 两株禾谷丝核菌候选效应因子的单克隆PCR检测第43页
    3.9 利用SMART数据库对候选效应因子预测的结果第43-44页
    3.10 候选效应因子原核表达载体的构建第44页
    3.11 不同诱导温度及时间对融合蛋白可溶性表达的影响第44-45页
    3.12 效应因子粗蛋白产物对Wen6叶片的致病性鉴定第45-47页
4.讨论第47-48页
5.全文总结第48-49页
参考文献第49-60页
致谢第60页

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