| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 酿酒酵母的胁迫因素 | 第12-14页 |
| 1.1.1 乙酸胁迫 | 第12-13页 |
| 1.1.2 高温胁迫 | 第13页 |
| 1.1.3 氧化胁迫 | 第13-14页 |
| 1.2 酿酒酵母菌株胁迫耐受性研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 环境胁迫耐性功能基因研究 | 第15-17页 |
| 1.2.2 保护性物质对环境胁迫耐性的影响 | 第17-19页 |
| 1.2.3 转录因子 | 第19-20页 |
| 1.3 本课题研究涉及的靶点基因 | 第20-23页 |
| 1.3.1 CAR1 | 第20-21页 |
| 1.3.2 YHB1 | 第21-22页 |
| 1.3.3 PRB1 | 第22页 |
| 1.3.4 ATX1 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的意义和内容 | 第23-24页 |
| 2 CAR1过表达对酿酒酵母环境胁迫耐性的影响 | 第24-44页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.2.1 实验相关仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验菌株 | 第25页 |
| 2.2.3 实验相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 获取未知功能基因及载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.2 目的基因转入大肠杆菌DH5α | 第27-30页 |
| 2.3.3 电转化法获得目的基因过表达的Sc4126的突变体 | 第30-31页 |
| 2.3.4 实时定量实验 | 第31页 |
| 2.3.5 耐性平板比较实验 | 第31页 |
| 2.3.6 胁迫条件下液体发酵实验 | 第31-32页 |
| 2.3.7 胁迫条件下胞内酶活分析 | 第32-33页 |
| 2.3.8 胁迫条件下胞内氨基酸分析实验 | 第33-34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-42页 |
| 2.4.1 4126-CAR1菌株的平板耐受性评价 | 第34-35页 |
| 2.4.2 4126-CAR1菌株与4126-HO菌株不同条件下发酵比较 | 第35-36页 |
| 2.4.3 不同发酵条件下4126-CAR1与对照菌株胞内酶活分析 | 第36-38页 |
| 2.4.4 4126-CAR1与对照菌株胞内氨基酸分析 | 第38-42页 |
| 2.5 讨论 | 第42-43页 |
| 2.6 小结 | 第43-44页 |
| 3 YHB1过表达对酿酒酵母环境胁迫耐性的影响 | 第44-51页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.2.1 实验相关仪器设备 | 第44页 |
| 3.2.2 实验菌株和引物 | 第44页 |
| 3.2.3 实验相关试剂 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-46页 |
| 3.3.1 获取未知功能基因及载体的构建 | 第45页 |
| 3.3.2 目的基因转入大肠杆菌DH5α | 第45页 |
| 3.3.3 电转化法获得目的基因过表达的Sc4126的突变体 | 第45页 |
| 3.3.4 实时定量实验 | 第45-46页 |
| 3.3.5 耐性平板比较实验 | 第46页 |
| 3.3.6 胁迫条件下液体发酵实验 | 第46页 |
| 3.3.7 胁迫条件下胞内酶活分析 | 第46页 |
| 3.4 实验结果 | 第46-50页 |
| 3.4.1 4126-YHB1菌株的平板耐受性评价实验 | 第46-47页 |
| 3.4.2 4126-YHB1菌株与4126-HO菌株不同条件下发酵结果比较 | 第47-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50页 |
| 3.6 小结 | 第50-51页 |
| 4 PRB1过表达对酿酒酵母菌环境胁迫耐性的影响 | 第51-60页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 实验相关仪器设备 | 第51页 |
| 4.2.2 实验菌株和引物 | 第51页 |
| 4.2.3 实验相关试剂 | 第51-52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.3.1 获取未知功能基因及载体的构建 | 第52页 |
| 4.3.2 目的基因转入大肠杆菌DH5α | 第52页 |
| 4.3.3 电转化法获得目的基因过表达的Sc4126的突变体 | 第52页 |
| 4.3.4 实时定量实验 | 第52-53页 |
| 4.3.5 耐性平板比较实验 | 第53页 |
| 4.3.6 胁迫条件下液体发酵实验 | 第53页 |
| 4.3.7 胁迫条件下胞内酶活分析 | 第53页 |
| 4.4 实验结果 | 第53-58页 |
| 4.4.1 PRB1在Sc4126菌株中进行过表达后平板耐受性评价实验 | 第53-54页 |
| 4.4.2 PRB1在BY4741菌株中进行敲除后平板耐受性评价实验 | 第54-55页 |
| 4.4.3 4126-PRB1菌株与4126-HO菌株在5 g/L酸胁迫下发酵 | 第55-56页 |
| 4.4.4 4126-PRB1菌株与4126-HO菌株高温条件下的发酵 | 第56-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58-59页 |
| 4.6 小结 | 第59-60页 |
| 5 ATX1过表达对酿酒酵母环境胁迫耐性的影响 | 第60-77页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料 | 第60页 |
| 5.2.1 实验相关仪器设备 | 第60页 |
| 5.2.2 实验菌株 | 第60页 |
| 5.2.3 实验相关试剂 | 第60页 |
| 5.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.3.1 获取未知功能基因及载体的构建 | 第61页 |
| 5.3.2 目的基因转入大肠杆菌DH5α | 第61页 |
| 5.3.3 电转化法获得目的基因过表达的Sc4126的突变体 | 第61页 |
| 5.3.4 耐性平板比较实验 | 第61页 |
| 5.3.5 胁迫条件下液体发酵实验 | 第61页 |
| 5.3.6 胁迫条件下胞内酶活分析 | 第61页 |
| 5.3.7 胁迫条件下胞内金属元素分析 | 第61-62页 |
| 5.4 实验结果 | 第62-75页 |
| 5.4.1 4126-ATX1菌株的平板耐受性评价实验 | 第62-63页 |
| 5.4.2 4126-ATX1菌株的低pH平板评价实验 | 第63-64页 |
| 5.4.3 4126-ATX1菌株的金属毒性耐受性平板评价实验 | 第64-65页 |
| 5.4.4 4126-ATX1菌株与4126-HO菌株不同条件下发酵结果比较 | 第65-67页 |
| 5.4.5 4126-ATX1菌株耐受性机制相关分析 | 第67-71页 |
| 5.4.6 胁迫发酵实验条件下胞内金属元素检测实验 | 第71-72页 |
| 5.4.7 4126-ATX1与4126-HO菌株补加铜离子发酵比较 | 第72-73页 |
| 5.4.8 4126-ATX1与4126-HO菌株补加FeSO_4~·7H_2O的发酵实验 | 第73-74页 |
| 5.4.9 4126-ATX1与4126-HO菌株在低pH条件发酵性能的比较 | 第74-75页 |
| 5.5 讨论 | 第75-76页 |
| 5.6 小结 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 创新点 | 第78-79页 |
| 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
